[發明專利]一種報告基因細胞株及其構建方法和應用在審
| 申請號： | 201910864683.8 | 申請日： | 2019-09-12 |
| 公開（公告）號： | CN110551756A | 公開（公告）日： | 2019-12-10 |
| 發明（設計）人： | 李文英;甄瀅瀅;殷偉;邵喆;黃應峰 | 申請（專利權）人： | 寶船生物醫藥科技(上海)有限公司 |
| 主分類號： | C12N15/85 | 分類號： | C12N15/85;C12N15/65;C12N5/10;C12Q1/02 |
| 代理公司： | 11332 北京品源專利代理有限公司 | 代理人： | 鞏克棟 |
| 地址： | 201210 上海市*** | 國省代碼： | 上海;31 |
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| 摘要： | |||
| 搜索關鍵詞： | 報告基因 細胞株 報告基因質粒 信號響應元件 結合基序 單克隆抗體 核苷酸序列 特異性結合 抗體阻斷 重要意義 敏感度 監測 評估 構建 抗體 拷貝 檢測 應用 | ||
1.一種報告基因質粒，其特征在于，所述報告基因質粒包括STAT6信號響應元件；
所述STAT6信號響應元件包括至少一個拷貝的STAT6結合基序；
所述STAT6結合基序的核苷酸序列如SEQ ID NO:1所示。
2.根據權利要求1所述的報告基因質粒，其特征在于，所述STAT6信號響應元件包括五個拷貝的STAT6結合基序；
優選地，所述STAT6信號響應元件的核苷酸序列如SEQ ID NO:2所示。
3.一種報告基因細胞株，其特征在于，所述報告基因細胞株包括如權利要求1或2所述的報告基因質粒；
優選地，所述報告基因細胞株還包括I型IL-4R表達質粒；
優選地，所述I型IL-4R表達質粒包括通過IRES元件串聯表達的IL-4Rα和commonγchain；
優選地，所述報告基因細胞株為中國倉鼠卵巢細胞K1。
4.一種如權利要求3所述的報告基因細胞株的構建方法，其特征在于，所述方法包括：
構建報告基因質粒和I型IL-4R表達質粒，轉染宿主細胞，抗性篩選后得到所述報告基因細胞株。
5.根據權利要求4所述的構建方法，其特征在于，所述報告基因質粒的構建方法包括以下步驟：
將如SEQ ID NO:2所示的核苷酸序列插入熒光素酶報告基因載體，轉化入大腸桿菌克隆菌株，抗性、測序篩選后獲得重組質粒，得到報告基因質粒；
優選地，所述熒光素酶報告基因載體為pGL4.23[luc2/minP]；
優選地，所述SEQ ID NO:2所示的核苷酸序列插入熒光素酶報告基因載體的Acc651和Hind III酶切位點之間。
6.根據權利要求4或5所述的構建方法，其特征在于，所述I型IL-4R表達質粒的構建方法包括以下步驟：
(1)將IL-4Rα基因片段插入pcDNA3.3-TOPO載體，轉化入大腸桿菌克隆菌株，抗性篩選、測序后獲得重組質粒，得到pcDNA3.3-IL4Rα；
(2)將commonγchain基因片段插入pOptiVEC-TOPO載體，轉化入大腸桿菌克隆菌株，抗性篩選、測序后獲得重組質粒，得到pOptiVEC-TOPO-commonγchain；
(3)以pOptiVEC-TOPO-commonγchain為模板，PCR擴增得到IRES-commonγchain序列，通過Nhe I限制性內切酶位點插入到步驟(1)得到的pcDNA3.3-IL4Rα載體中，得到所述I型IL-4R表達質粒；
優選地，步驟(1)所述IL-4Rα基因片段插入pcDNA3.3-TOPO載體的Xba I和Pme I酶切位點之間；
優選地，步驟(2)所述commonγchain基因片段插入pOptiVEC-TOPO載體的BglII和PmeI酶切位點之間。
7.根據權利要求4-6任一項所述的構建方法，其特征在于，所述抗性篩選采用潮霉素B和G418的混合液進行。
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