[發明專利]一種快速純化血清中IgG和IgE的方法

在審

• 申請號: 201910863313.2
• 申請日: 2019-09-12
• 公開（公告）號: CN110567787A
• 公開（公告）日: 2019-12-13
• 發明（設計）人: 王彥波;傅玲琳;王翀
• 申請（專利權）人: 浙江工商大學
• 主分類號: G01N1/34
• 分類號: G01N1/34
• 代理公司: 35232 廈門創象知識產權代理有限公司
• 代理人: 尤懷成;王鳳玲

本發明涉及一種快速純化血清中IgG和IgE的方法，該方法包括：構建串聯親和純化系統，首先利用Protein G瓊脂糖凝膠與血清混合孵育，以獲得結合成分A和流穿成分B；再利用Protein L瓊脂糖凝膠與所述流穿成分B混合孵育，以獲得結合成分C和流穿成分D；接著，利用甘氨酸緩沖液洗脫所述結合成分A，收集洗脫液，用HEPES?Na緩沖液中和，以獲得純化后的IgG溶液；最后，利用甘氨酸緩沖液洗脫所述結合成分C，收集洗脫液，用HEPES?Na緩沖液中和，以獲得純化后的IgE溶液。該純化方法能夠在1小時內從少量血清樣品中分別純化得到IgG和IgE，從而為食物過敏原的檢測提供材料。

技術領域

本發明涉及免疫學技術領域，具體涉及一種快速純化血清中IgG和IgE的方法。

背景技術

食物過敏已成為全球性的食品安全問題，不僅造成巨大的經濟損失，還危害消費者健康，顯著降低生活質量。準確檢測食物過敏原是食物過敏研究的基礎，也是讓患者了解自己應該避開那些食物，以防過敏性休克。

目前，食物過敏大都是由IgE引起的I型超敏反應，過敏個體血清中的IgE能夠特異性識別并結合食物過敏原。基于此，IgE已成為食物過敏原檢測的主要工具。另一方面，食物成分進入人體后還可能引起常規免疫反應，產生特異性IgG；然而IgG并不直接參與食物過敏反應，其存在會干擾基于IgE的食物過敏原檢測。血清中IgE相對含量較低且存在大量性質類似的IgG干擾，因此利用粗血清進行過敏原檢測容易出現假陽性和假陰性，而利用從血清中純化的IgE進行檢測可以規避這一問題。然而，由于IgE與IgG性質相似，且血清樣品往往較為珍貴，常規的純化方法(如色譜法等)不但需要花費數天的時間，還會造成大量浪費，且無法達到理想的分離效果。

相關技術中，有文獻報道能夠利用IgE特異性抗體進行血清中IgE的純化。但是，抗體成本高昂且難以穩定保存；此外，抗體本身也是一種污染源，會造成純化產物的二次污染。因此，純化血清中IgE的方法有待改進。

發明內容

本發明旨在至少在一定程度上解決相關技術中的技術問題之一。為此，本發明的目的在于提供一種快速純化血清中IgG和IgE的方法。該純化方法能夠在1小時內從少量血清樣品中分別純化得到IgG和IgE，從而為食物過敏原的檢測提供材料。

為此，在本發明的一方面，本發明提出了一種快速純化血清中IgG和IgE的方法，包括以下步驟：

(1)將Protein G瓊脂糖凝膠與血清混合孵育，以獲得結合成分A和流穿成分B；

(2)將Protein L瓊脂糖凝膠與所述流穿成分B混合孵育，以獲得結合成分C和流穿成分D；

(3)將所述結合成分A用甘氨酸緩沖液洗脫，收集洗脫液，洗脫液用HEPES-Na緩沖液中和，以獲得純化IgG溶液；

(4)將所述結合成分C用甘氨酸緩沖液洗脫，收集洗脫液，洗脫液用HEPES-Na緩沖液中和，以獲得純化IgE溶液。

根據本發明的一種快速純化血清中IgG和IgE的方法，通過串聯親和純化技術，先用Protein G瓊脂糖凝膠將血清中的IgG完全結合，之后用Protein L瓊脂糖凝膠將IgE結合，再分別洗脫兩個結合成分的物質，可從少量血清樣本中依次獲得IgG和IgE純品，可以作為抗原和過敏原檢測的工具；并且整個純化過程在1小時內可完成，純化速度快。

另外，根據本發明上述實施例提出的一種快速純化血清中IgG和IgE的方法，還可以具有如下附加的技術特征：

根據本發明的實施例，在所述步驟(1)中，Protein G瓊脂糖凝膠與血清的體積比為2:1～5:1。

根據本發明的實施例，在所述步驟(1)中，混合孵育的溫度為4℃，孵育時間為30～120min。