[發明專利]一種快速純化血清中IgG和IgE的方法在審
| 申請號： | 201910863313.2 | 申請日： | 2019-09-12 |
| 公開（公告）號： | CN110567787A | 公開（公告）日： | 2019-12-13 |
| 發明（設計）人： | 王彥波;傅玲琳;王翀 | 申請（專利權）人： | 浙江工商大學 |
| 主分類號： | G01N1/34 | 分類號： | G01N1/34 |
| 代理公司： | 35232 廈門創象知識產權代理有限公司 | 代理人： | 尤懷成;王鳳玲 |
| 地址： | 310012 浙*** | 國省代碼： | 浙江;33 |
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| 摘要： | |||
| 搜索關鍵詞： | 甘氨酸緩沖液 混合孵育 緩沖液 洗脫液 血清 洗脫 中和 瓊脂糖凝膠 食物過敏原 親和純化 血清樣品 再利用 構建 串聯 檢測 | ||
1.一種快速純化血清中IgG和IgE的方法，其特征在于，包括以下步驟：
(1)將Protein G瓊脂糖凝膠與血清混合孵育，以獲得結合成分A和流穿成分B；
(2)將Protein L瓊脂糖凝膠與所述流穿成分B混合孵育，以獲得結合成分C和流穿成分D；
(3)將所述結合成分A用甘氨酸緩沖液洗脫，收集洗脫液，洗脫液用HEPES-Na緩沖液中和，以獲得純化IgG溶液；
(4)將所述結合成分C用甘氨酸緩沖液洗脫，收集洗脫液，洗脫液用HEPES-Na緩沖液中和，以獲得純化IgE溶液。
2.如權利要求1所述的快速純化血清中IgG和IgE的方法，其特征在于，在所述步驟(1)中，Protein G瓊脂糖凝膠與血清的體積比為2:1～5:1。
3.如權利要求1所述的快速純化血清中IgG和IgE的方法，其特征在于，在所述步驟(1)中，混合孵育的溫度為4℃，孵育時間為30～120min。
4.如權利要求1所述的快速純化血清中IgG和IgE的方法，其特征在于，在所述步驟(2)中，Protein L瓊脂糖凝膠與血清的體積比為1:5～1:20。
5.如權利要求1所述的快速純化血清中IgG和IgE的方法，其特征在于，在所述步驟(2)中，混合孵育的溫度為4℃，孵育時間為60～120min。
6.如權利要求1所述的快速純化血清中IgG和IgE的方法，其特征在于，在所述步驟(3)和所述步驟(4)中，甘氨酸緩沖液濃度為100mmol/L，pH為2.0～3.0。
7.如權利要求1所述的快速純化血清中IgG和IgE的方法，其特征在于，在所述步驟(3)和所述步驟(4)中，HEPES-Na緩沖液濃度為200～500mmol/L，pH為7.5～9.0。
8.如權利要求1所述的快速純化血清中IgG和IgE的方法，其特征在于，所述血清為哺乳動物血清。
9.如權利要求1所述的快速純化血清中IgG和IgE的方法，其特征在于，所述步驟(3)獲得的IgG和所述步驟(4)獲得的IgE用于抗原、過敏原的免疫學檢測或者用于偶聯磁珠親和純化抗原或過敏原。
10.如權利要求9所述的快速純化血清中IgG和IgE的方法，其特征在于，所述免疫學檢測包括ELISA、Western blot、dot blot、肥大細胞脫顆粒。
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