[發明專利]一種金水寶片氨基酸的含量測定方法

在審

• 申請號: 201910862114.X
• 申請日: 2019-09-12
• 公開（公告）號: CN112485338A
• 公開（公告）日: 2021-03-12
• 發明（設計）人: 彭常春;李義保;黃小勇;張克勤;李輝虎
• 申請（專利權）人: 江西金水寶制藥有限公司;江西濟民可信藥業有限公司
• 主分類號: G01N30/02
• 分類號: G01N30/02;G01N30/06;G01N30/34
• 代理公司: 北京華科聯合專利事務所(普通合伙) 11130
• 代理人: 孟旭;涂榮昌

1.一種金水寶制劑中氨基酸的含量測定方法，其特征在于，所述方法，步驟如下：

1)供試品溶液的制備：稱取金水寶制劑，將其制成粉末，加濃鹽酸，充入氮氣無氧加熱水解，取出后放至常溫，將水解液用濾紙濾過并用水定容，取定容后的氨基酸水解液，用樣品稀釋液定容，即得供試品溶液；

2)對照品溶液的制備：精密稱取各氨基酸對照品適量置同一容量瓶中，加入樣品稀釋液定容即得混合對照品溶液；

3)測定，將供試品溶液和對照品溶液分別注入氨基酸自動分析儀，得到色譜圖，根據色譜圖計算每一種氨基酸的含量以及全部氨基酸的含量。

2.如權利要求1所述的含量測定方法，其特征在于，其中氨基酸自動分析儀的色譜條件如下：LCAK06/Na離子柱；流動相：流動相A(稱取二水合檸檬酸三鈉11.8g、檸檬酸6.0g、苯酚0.5g，加適量水溶解，加甲醇65mL和濃鹽酸5.6mL，用水定容至1000mL，NaOH調pH至3.45)、流動相B(稱取二水合檸檬酸三鈉19.6g、氫氧化鈉3.1g、硼酸5.0g，加適量水溶解并定容至1000mL，HCl調pH值至10.85)；按照以下條件進行梯度洗脫：

其中，所述稀釋液的制備方法如下：稱取二水合檸檬酸三鈉11.8g、檸檬酸6.0g、苯酚2.0g加適量水溶解后加入濃鹽酸10.4mL，定容至1000mL，用氫氧化鈉溶液調節pH值為2.2，即得。

3.如權利要求1所述的含量測定方法，其特征在于，其中，在步驟中需要用到茚三酮溶液，所述茚三酮溶液的制備方法：稱取三水乙酸鈉272.0g、醋酸鉀196.0g，量取乙酸200mL，加適量水溶解后定容至1000mL即得鈉鉀緩沖液，稱取茚三酮20.0g、苯酚2.0g，加入甲醇600mL，緩慢攪拌溶解后加鈉鉀緩沖液400mL混合，氮吹10min，再加入0.2g抗壞血酸后氮吹10min即得。

4.如權利要求1所述的含，量測定方法，其特征在于，其中，各氨基酸對照品為：門冬氨酸、蘇氨酸、絲氨酸、谷氨酸、甘氨酸、丙氨酸、纈氨酸、甲硫氨酸、異亮氨酸、亮氨酸、酪氨酸、苯丙氨酸、組氨酸、賴氨酸、精氨酸、脯氨酸的對照品，這些對照品可以從市場上購買得到，也可以按照現有技術制備得到，其純度較高，一般大于98％重量百分比。

5.如權利要求1所述的含量測定方法，其特征在于，包括以下步驟：

1)供試品溶液的制備：精密稱取金水寶片粉末100mg置25mL水解管中，加入6mol/L鹽酸溶液10mL后充氮氣密封，置于烘箱中水解14～22h，取出后放至常溫，將水解液用濾紙濾過并用水定容至50mL，取定容后的氨基酸水解液2mL，用樣品稀釋液定容至10mL，即得供試品溶液，

2)對照品溶液的制備：精密稱取天門冬氨酸、谷氨酸、絲氨酸、甘氨酸、組氨酸、精氨酸、蘇氨酸、丙氨酸、脯氨酸、酪氨酸、纈氨酸、甲硫氨酸、異亮氨酸、亮氨酸、苯丙氨酸及賴氨酸對照品適量置同一容量瓶中，加稀釋液溶液定容即得混合對照品溶液，

3)分別精密吸取對照品溶液及供試品溶液50μl，注入氨基酸自動分析儀，測定，得到色譜圖，根據色譜圖計算每一種氨基酸的含量以及全部氨基酸的含量，

色譜條件：LCAK06/Na離子柱；流動相：流動相A(稱取二水合檸檬酸三鈉11.8g、檸檬酸6.0g、苯酚0.5g，加適量水溶解，加甲醇65mL和濃鹽酸5.6mL，用水定容至1000mL，NaOH調pH至3.45)、流動相B(稱取二水合檸檬酸三鈉19.6g、氫氧化鈉3.1g、硼酸5.0g，加適量水溶解并定容至1000mL，HCl調pH值至10.85)；梯度洗脫

根據本發明的測定方法，優選測定對象的金水寶制劑為金水寶片，每片總氨基酸含量不少于50mg為合格品。

6.如權利要求1所述的含量測定方法，其特征在于，步驟如下：

1)供試品溶液的制備：精密稱取經勻質處理的金水寶片約0.1g置25mL水解管中，加入6mol/L鹽酸溶液10mL后充氮氣密封，置110℃烘箱中水解18h，取出后放至常溫，將水解液用濾紙濾過并用水定容至50mL，取定容后的氨基酸水解液2mL，用樣品稀釋液定容至10mL，即得供試品溶液，

2)對照品溶液的制備：另取天門冬氨酸、谷氨酸、絲氨酸、甘氨酸、組氨酸、精氨酸、蘇氨酸、丙氨酸、脯氨酸、酪氨酸、纈氨酸、甲硫氨酸、異亮氨酸、亮氨酸、苯丙氨酸及賴氨酸對照品適量，加樣品稀釋液配制成濃度各為0.06、0.06、0.03、0.03、0.04、0.03、0.04、0.04、0.03、0.03、0.04、0.03、0.04、0.01、0.01、0.01mg/ml的混合溶液，作為對照品溶液，

3)測定：分別精密吸取對照品溶液及供試品溶液50μl，注入氨基酸自動分析儀，測定，即得，

色譜條件：LCAK06/Na離子柱；流動相：流動相A(稱取二水合檸檬酸三鈉11.8g、檸檬酸6.0g、苯酚0.5g，加適量水溶解，加甲醇65mL和濃鹽酸5.6mL，用水定容至1000mL，NaOH調pH至3.45)、流動相B(稱取二水合檸檬酸三鈉19.6g、氫氧化鈉3.1g、硼酸5.0g，加適量水溶解并定容至1000mL，HCl調pH值至10.85)；梯度洗脫

根據本發明的測定方法，優選測定對象的金水寶制劑為金水寶片，每片總氨基酸含量不少于50mg為合格品。