[發明專利]一種用于哈維氏弧菌群體感應的抑制肽及其制備方法和應用

有效

• 申請號: 201910862017.0
• 申請日: 2019-09-12
• 公開（公告）號: CN110590918B
• 公開（公告）日: 2022-09-30
• 發明（設計）人: 呂欣然;孫夢桐;白鳳翎;李學鵬;崔天琦;張德福
• 申請（專利權）人: 渤海大學
• 主分類號: C07K14/28
• 分類號: C07K14/28;C07K1/36;C07K1/34;C07K1/16;A23L33/18;A61K38/16;A61P31/04
• 代理公司: 錦州遼西專利事務所(普通合伙) 21225
• 代理人: 王佳佳

一種用于哈維氏弧菌群體感應的抑制肽及其制備方法和應用，通過對乳酸乳球菌(Lactococcus lactis)LY3?1進行發酵培養、分離純化得到用于哈維氏弧菌群體感應系統的活性肽，其氨基酸序列為Ala?Leu?Ser?Leu?Val?Lys?Ile?His?Gly?Arg，命名為LQLY3?1。與傳統抗菌藥物作用機制相比，活性肽LQLY3?1以群體感應系統為作用靶點，通過干擾細菌群體感應系統調控的致病性，不影響細菌的自身生長，因此不會使細菌產生耐藥性；該活性肽本身及其衍生物可以作為先導化合物指導開發新型抗菌制劑應用于食品、醫學和農業等領域，對人類健康和農業發展具有重大意義。

技術領域

本發明涉及一種用于哈維氏弧菌群體感應的抑制肽及其制備方法和應用。

背景技術

傳統的抗菌制劑都是以單個細菌為目標，作用于細菌的細胞壁、細胞膜以及DNA等靶點，最終達到抑制生長或直接殺死的目的。在這種生存條件下，細菌會迅速變異，演變為耐藥細菌或超級細菌，給人類健康帶來巨大危害。因此，開發天然的低耐藥性的高效抗菌劑是研究者們一直努力的方向。群體感應(Quorum sensing，QS)是細菌根據自身細胞密度變化進行自我調節的一種群體行為。細菌在繁殖過程中會分泌一些特定的信號分子，當信號分子達到一定濃度閾值時，會與其受體蛋白結合，導致受體蛋白構象發生改變，從而激活某些特定基因的表達，呈現出新的行為特征。如生物膜的形成、毒性基因的表達、生物發光和胞外多糖的合成等都受群體感應系統的調控。研究表明，微生物源群體感應抑制劑(quorumsensing inhibitor,QSI)在不干擾其正常生命活動的前提下，以細菌的群體感應系統為靶點，控制細菌生物膜的形成和毒力因子的產生等代謝過程，從而降低病原菌的致病性，具有不易誘導細菌耐藥性又可以起到防治細菌病害的優點。

發明內容

本發明要解決的技術問題是提供一種用于哈維氏弧菌群體感應的抑制肽及其制備方法和應用，該群體感應抑制肽在不抑制哈維氏弧菌生長的范圍內，能夠顯著的降低其致病因子的表達，減弱哈維氏弧菌的耐藥性。

本發明的技術解決方案是：

一種用于哈維氏弧菌群體感應的抑制肽，其氨基酸序列為Ala-Leu-Ser-Leu-Val-Lys-Ile-His-Gly-Arg(ALSLVKIHGR)，分子量為1090Da，命名為LQLY3-1。

本發明提供的活性物質來源于乳酸乳球菌(Lactococcus lactis)LY3-1，該菌株保藏于廣東省微生物菌種保藏中心，保藏日期為2019年8月26日，保藏號為GDMCCNo.60751。

一種用于哈維氏弧菌群體感應的抑制肽的制備方法，其具體步驟如下：

(1)發酵乳酸乳球菌LY3-1，離心、過膜，獲得無細胞上清液；

(2)乙酸乙酯萃取無細胞上清液，獲得肽LQLY3-1粗品；

(3)超濾結合凝膠層析法純化肽LQLY3-1粗品，獲得Mr5kDa的肽LQLY3-1精制品；

(4)采用高效液相色譜法，純化肽LQLY3-1精制品，獲得肽LQLY3-1純品；

進一步的，發酵乳酸乳球菌LY3-1時，于MRS液體培養基，37℃發酵時間為12h。

進一步的，過膜時，用0.45μm濾膜過濾。

進一步的，所述的乙酸乙酯萃取條件包括：V(無細胞上清液)：V(乙酸乙酯)＝1:1，時間為10min-15min。

進一步的，所述的凝膠層析條件包括：Sephadex G-25凝膠柱，平衡液和洗脫液為20mM磷酸鹽緩沖液(pH6.0)，流速為0.5mL/min，上樣量為2.0mL，280nm處測定其吸光度值，收集80min處洗脫液。