[發(fā)明專利]一種高產(chǎn)DHA裂殖壺菌突變菌株的誘變育種方法

在審

• 申請(qǐng)?zhí)枺?/td>: 201910860231.2
• 申請(qǐng)日: 2019-09-11
• 公開（公告）號(hào): CN112481250A
• 公開（公告）日: 2021-03-12
• 發(fā)明（設(shè)計(jì)）人: 劉憲華;李建濤;汪光義;張賽;葉會(huì)科
• 申請(qǐng)（專利權(quán)）人: 天津大學(xué)青島海洋技術(shù)研究院
• 主分類號(hào): C12N13/00
• 分類號(hào): C12N13/00;C12N1/14;C12R1/645
• 代理公司: 暫無信息
• 代理人: 暫無信息

1.一種高產(chǎn)DHA裂殖壺菌突變菌株的誘變育種方法，其特征在于：選取對(duì)數(shù)時(shí)期的裂殖壺菌，用無菌蒸餾水制成菌懸液，將菌懸液置于ARTP誘變儀內(nèi)進(jìn)行第一輪輻照處理，取輻照后的菌懸液適當(dāng)稀釋后均勻涂布在固體平板上，于培養(yǎng)箱中避光保存，將第一輪輻照后油脂含量高的菌株作為第二輪誘變輻照的出發(fā)菌株，通過搖瓶發(fā)酵培養(yǎng)測(cè)得的DHA產(chǎn)量為依據(jù)，最終篩選出高產(chǎn)DHA的裂殖壺菌菌株。

2.根據(jù)權(quán)利要求1所述的一種高產(chǎn)DHA裂殖壺菌突變菌株的誘變育種方法，其特征在于：所述的裂殖壺菌菌懸液是在對(duì)數(shù)時(shí)期使用無菌蒸餾水配制而成的，其細(xì)胞濃度為OD₆₆₀值0.3-0.4之間。

3.根據(jù)權(quán)利要求1所述的一種高產(chǎn)DHA裂殖壺菌突變菌株的誘變育種方法，其特征在于：所述ARTP誘變儀工作條件為：取菌懸液10 μL均勻涂布在無菌載片上，將載片放于培養(yǎng)皿中并轉(zhuǎn)移至ARTP誘變儀凹槽內(nèi)，凹槽下方固定座固定相應(yīng)的EP管，用于承接載片，ARTP誘變儀輻射時(shí)間為0、10、20、30、40、50、60 s，功率設(shè)定為120 W，氣量設(shè)定為10 SLM，以此方法誘變輻照兩輪。

4.根據(jù)權(quán)利要求1所述的一種高產(chǎn)DHA裂殖壺菌突變菌株的誘變育種方法，其特征在于：所述油脂產(chǎn)量高的新菌株是以磷酸香草醛法獲取，具體為：收集培養(yǎng)4 d的發(fā)酵液5 mL于離心管內(nèi)，8000 rpm離心10 min，蒸餾水洗滌2次，定容至5 mL，取100 μL菌液于10 mL離心管內(nèi)，對(duì)照取蒸餾水，加入18 mol/L的 H₂SO₄ 2mL，震蕩混勻，沸水浴反應(yīng)10 min，常溫水浴5 min；加入5 mL磷酸香草醛試劑，37℃保溫15 min，常溫水浴10 min，于530 nm測(cè)其OD值。

5.根據(jù)權(quán)利要求1所述的一種高產(chǎn)DHA裂殖壺菌突變菌株的誘變育種方法，其特征在于：選擇致死率在90%左右的處理時(shí)間進(jìn)行后續(xù)ARTP誘變處理依據(jù)。