[發明專利]一種江西道地藥材枳殼的鑒別方法

在審

• 申請號: 201910852758.0
• 申請日: 2019-09-10
• 公開（公告）號: CN112557563A
• 公開（公告）日: 2021-03-26
• 發明（設計）人: 梁鑫淼;金紅利;戚華文;徐鑫;高德嵩;劉艷芳;王超然
• 申請（專利權）人: 泰州醫藥城國科化物生物醫藥科技有限公司
• 主分類號: G01N30/88
• 分類號: G01N30/88;G01N30/86
• 代理公司: 南京瑞弘專利商標事務所(普通合伙) 32249
• 代理人: 孫峰

1.一種江西道地藥材枳殼的鑒別方法，其特征在于，包括以下步驟：

a) 對照品溶液制備：取適量柚皮苷、新橙皮苷、蕓香柚皮苷、桔皮苷，精密稱定，加50%~100%甲醇或乙腈制成含柚皮苷、新橙皮苷、蕓香柚皮苷、桔皮苷的混合對照品溶液；

b) 供試品溶液制備：取枳殼藥材粉末，精密稱定，過三號篩，置具塞錐形瓶中，精密加入甲醇或乙醇，濃度為50%~100%，料液比為1：10~1：100，稱定重量，回流或超聲處理15 min-45 min，放冷，再稱定重量，用甲醇或乙醇補足減失的重量，搖勻，濾過，取續濾液；

c) 高效液相色譜測定：分別精密吸取對照品溶液及供試品溶液，注入高效液相色譜儀，記錄指紋圖譜；所述色譜柱填料為十八烷基硅烷鍵合硅膠，流動相A為純甲醇或純乙腈，流動相B為含添加劑濃度0.1%~0.5%甲酸或乙酸的水相，流速為0.8 mL/min-1.2 mL/min，所述進樣量為5 μL -10 μL，所述檢測波長為240nm -340nm；

d) 指紋圖譜的建立：取15批江西道地藥材枳殼分別按步驟b)制備供試品溶液，按步驟c)依次高效液相色譜測定，記錄指紋圖譜，將所述指紋圖譜全部導入中藥色譜指紋圖譜相似度評價系統軟件，選擇不同批次枳殼的指紋圖譜中均存在的色譜峰作為共有色譜峰，生成標準對照指紋圖譜，計算各共有色譜峰的相對保留時間、峰面積；

e) 共有色譜峰結構的鑒定：采用液相色譜-串聯質譜儀鑒定共有色譜峰，液相色譜方法與步驟c)一致，質譜所用的電離模式為電噴霧正離子電離，所述氣簾氣：25-45 psi；Gas1：30-70 psi；Gas 2：30-70 psi；溫度：550-650 ℃；離子化壓力：4500-5500 V；去簇電壓：60-80 V；裂解電壓：30-40 V; CE Spread：10-20 V；

f) 鑒別分析：以步驟d)指紋圖譜中共有色譜峰峰面積為變量，導入SPSS22.0軟件，采用組間均連法，選擇平方歐式距離為測度對江西道地藥材枳殼與其他地區枳殼進行聚類分析；或者以步驟d)指紋圖譜中共有色譜峰峰面積為數據，用SIMICA 14.1進行主成分分析，確定主成分及方差貢獻率，以此區別江西道地藥材枳殼與其他地區枳殼。

2.根據權利要求1所述的一種江西道地藥材枳殼的鑒別方法，其特征在于，所述步驟a)中，取適量柚皮苷、新橙皮苷、蕓香柚皮苷、桔皮苷，精密稱定，加50%甲醇制成每1 mL含柚皮苷80 μg~150 μg、新橙皮苷80μg ~150 μg、蕓香柚皮苷80 μg~150 μg、桔皮苷80 μg~150 μg的混合對照品溶液。

3.根據權利要求1所述的一種江西道地藥材枳殼的鑒別方法，其特征在于，所述步驟b)中，取枳殼藥材粉末，精密稱定，過三號篩，置具塞錐形瓶中，加入濃度為50%-100%的甲醇，料液比為1：10~1：100，稱定重量，超聲處理20 min-40 min，放冷，再稱定重量，用甲醇或乙醇補足減失的重量，搖勻，濾過，取續濾液。

4.根據權利要求1所述的一種江西道地藥材枳殼的鑒別方法，其特征在于，所述步驟c)中，色譜柱長度為100 mm-250 mm，直徑為2.1 mm-4.6 mm，粒徑為1.7 μm-5 μm，流動相A為純乙腈，流動相B為含添加劑濃度0.1%~0.5%甲酸的水相，采用梯度洗脫，0 min~65 min內流動相A的比例從5%~95%，流動相B的比例從95%~5%。

5.根據權利要求1所述的一種江西道地藥材枳殼的鑒別方法，其特征在于，所述步驟d)中，確定11個共有色譜峰，生成標準對照指紋圖譜。

6.根據權利要求1所述的一種江西道地藥材枳殼的鑒別方法，其特征在于，所述步驟e)中，Gas 1為45-60 psi，Gas 2為45-60 psi。