[發明專利]一種高度核靶向性抗腫瘤納米藥物的制備方法及其應用

在審

• 申請號: 201910847823.0
• 申請日: 2019-09-09
• 公開（公告）號: CN110575546A
• 公開（公告）日: 2019-12-17
• 發明（設計）人: 單素艷;劉勇;林蜜蜜;晏露
• 申請（專利權）人: 溫州醫科大學
• 主分類號: A61K47/64
• 分類號: A61K47/64;A61K47/52;A61K31/407;A61P35/00;A61P35/04
• 代理公司: 42001 武漢宇晨專利事務所
• 代理人: 龔瑩瑩

本發明屬于納米藥物與生物醫學領域，公開了一種高度核靶向性抗腫瘤納米藥物的制備方法及其應用。本發明將具有細胞核靶向能力的多肽與石墨粉共混球磨，在常溫常壓下，制備具有高度腫瘤靶向能力和核靶向能力的多肽功能化石墨烯（TG）。進而采用乙酸等離子技術在TG上引入羧基，將抗腫瘤藥物絲裂霉素C（MMC）通過接載在TG上。所制備的的抗腫瘤納米藥物MMC?TG具有良好的腫瘤細胞核靶向能力，可高度選擇性的靶向到腫瘤細胞，腫瘤殺傷率達95%以上，但同時對正常細胞的損傷很小。實驗結果證實了所研制的納米藥物最先在細胞核發揮作用，具有高效的腫瘤細胞核靶向能力、腫瘤殺傷能力和腫瘤轉移抑制能力。

技術領域

本發明屬于納米藥物與生物醫學領域，具體涉及一種高度核靶向性抗腫瘤納米藥物的制備方法及其應用。

背景技術

腫瘤細胞的快速增殖性和易轉移性，造成了大多數癌癥的不可治愈性，給人類生命健康帶來了極大的威脅。譬如脈絡膜黑色素瘤，是一種成人最常見的眼部惡性腫瘤，病死率高，五年存活率低于50％，主要就是由于這類腫瘤的全身高轉移率造成的。盡管臨床上已經開發了多種技術治療脈絡膜黑色素瘤，包括手術切除，激光治療，放療和全身化療等，但是這些方法都只針對原位腫瘤，對轉移瘤束手無策，除了給病人造成了巨大的痛苦，并未能提高病人的存活率。腫瘤細胞的易轉移性，根源在細胞核，因為細胞核是基因遺傳和轉錄的源頭。因此，針對細胞核設計高靶向的抗腫瘤藥物，將會為抑制腫瘤細胞的轉移提供一條高效便捷的途徑。納米技術和納米材料的快速發展，開發了一系列可以穿透某些生理屏障的納米藥物載體，不僅有望提高藥物的生物利用率，也為研制高度核靶向的納米藥物提供了可行性。當前已開發的納米載體材料，比如由金屬，金屬氧化物，半導體和聚合物等，雖然能夠將藥物靶向遞送至腫瘤微環境，但效率低下，并且納米藥物無法穿透細胞核膜。

石墨烯及其衍生物具有獨特的尺寸效應和理化性能。石墨烯內在結構上獨特的大Π鍵使得基于石墨烯的納米藥物載體具有一定的負電性，對于具有弱酸正電性的腫瘤微環境具有較好的親和力。同時直徑小于200nm的石墨烯納米片，能夠穿過通透性較高的腫瘤區新生血管，聚集到腫瘤微環境，形成納米富集效應。因此石墨烯納米片被認為是高性能的腫瘤靶向藥物載體。本發明進一步在石墨烯上修飾具有核靶向能力的TAT多肽，從而實現對于腫瘤細胞核的高度靶向識別和藥物輸送。TAT是一種陽離子穿膜肽，具有很強的細胞膜穿透性和核膜穿透性，能夠到達細胞核，為納米藥物載體提供高效的細胞膜穿透能力和核靶向能力。我們進一步在所制備的TG納米載體上共價接載常規抗腫瘤藥物絲裂霉素C(MMC)，構建高度核靶向的抗腫瘤納米藥物MMC-TG。MMC能夠作用于細胞核，通過解聚DNA，抑制DNA 的復制來發揮作用。

綜上所述，本發明針對腫瘤細胞易轉移的臨床瓶頸問題，致力于構建高效核靶向性的抗腫瘤納米藥物MMC-TG，為抗腫瘤藥物的下一步發展提供新的思維與方向。

發明內容：

本發明針對腫瘤細胞易轉移的臨床瓶頸問題，提供了一種簡便高效的核靶向藥物納米載體TG與核靶向抗腫瘤藥物MMC-TG的制備方法。

本發明的另一目的在于提供了一種核靶向抗腫瘤藥物MMC-TG的制備方法的應用，該藥物能夠準確靶向到腫瘤細胞，并高效穿透細胞膜和核膜，進入細胞核，對腫瘤細胞(如脈絡膜黑色素瘤)的抑制率高達95％以上，并同時不對正常細胞造成較大損傷。

為解決上述技術問題，本發明采用如下技術方案：

一種簡便高效的核靶向藥物納米載體TG的制備方法，包括下述步驟：

多肽TAT(RKKRRQRRR)和石墨粉按質量比1：1～1：5的比例混合后置于球磨罐內，以300-500rpm的轉速室溫球磨3-5個小時。球磨結束后加入去離子水，洗出其中的產物，分別采用1000-3000轉速離心處理5-15分鐘，之后再采用5000-8000rpm的高速離心處理5-15 分鐘，依次除去沉淀中的雜質。然最后將沉淀分散于去離子水中，即為TAT多肽功能化的石墨烯(TG)。