[發明專利]測量裝置和測量方法

在審

• 申請號: 201910847273.2
• 申請日: 2019-09-09
• 公開（公告）號: CN110887820A
• 公開（公告）日: 2020-03-17
• 發明（設計）人: 山內豐彥;安彥修;山田秀直;松井永幸
• 申請（專利權）人: 浜松光子學株式會社
• 主分類號: G01N21/64
• 分類號: G01N21/64
• 代理公司: 北京尚誠知識產權代理有限公司 11322
• 代理人: 楊琦;尹明花

測量裝置(1A)具備干涉圖像取得部(2)、熒光圖像取得部(3)、運算部(4)和時序控制電路(5)。運算部(4)基于由干涉圖像取得部(2)取得的干涉圖像來制作光學厚度圖像，并且制作表示由熒光圖像取得部(3)取得的熒光圖像中的像素值大于閾值的區域的掩模圖像，并且在由光學厚度圖像中的掩模圖像表示的區域中求得光學厚度的積分值。由此，實現了能夠精確測量樣品中的對象物的量的裝置和方法。

技術領域

本發明涉及測量裝置和測量方法。

背景技術

需要通過在生物體外(in vitro)準確地測量從被檢測體提取的生物體樣品中所包含的脫氧核糖核酸(deoxyribonucleic acid，DNA)的總量。被測量的量是生物體樣品(例如，試管中的液體中的細胞或者被接種在培養皿中的細胞)中所包含的DNA的總量。觀察或測量從樣品整體中從以規定的比率x抽樣的部分，并且將該部分中所包含的DNA的總量除以抽樣率x，由此能夠求得樣品整體中所包含的DNA的總量。

吸收法和熒光法是作為測量樣品中所包含的DNA的總量的方法。在吸收法中，將DNA的吸收波長的光照射在樣品上，并測量樣品中的光的吸收量，由該吸收量根據朗伯-比爾定律能夠求得該樣品中的DNA的總量。在熒光法中，對樣品中的DNA進行特異性熒光染色，測量當將激發光照射在該樣品上時所產生的熒光的強度，根據其熒光的強度能夠求得該樣品中的DNA總量。

另外，由于能夠推測每個細胞核中含有的DNA的量，因此，通過將細胞核的區域特異性地染色，并且對其染色區域的個數進行計數，而能夠求得樣品中所包含的細胞核的個數，進一步，能夠由該細胞核的個數求得樣品中的DNA的總量(參照非專利文獻1)。

專利文獻1：國際公開第2016/121250號

非專利文獻1：Paul Held et al.,用Cytation^TM細胞成像多模微板閱讀器和DAPI染色細胞分析核染色細胞(Analysis of Nuclear Stained Cells,Using the Cytation^TM3Cell Imaging Multi-Mode Microplate Reader with DAPI-Stained Cells),BioTekInstruments,Inc.,Application Note,AN041013_13,Rev.04/10/13,pp.1-9(2013)

發明內容

然而，無論是對于樣品的整體或其一部分，都難以準確地求得在其中所包含的DNA的總量。也就是說，在吸收法中，測量結果受到除DNA之外的光吸收物質的影響。在熒光法中，測量結果受到除DNA之外的熒光物質的影響和背景光(例如自發熒光)的影響，另外，熒光染色的染色率根據細微的條件而會產生大變動。在吸收法或熒光法的任意一個方法中，都可以近似地使用濃度高的樣品，但是精確測量濃度低的樣品則是困難的。

此外，在熒光法中，在樣品的濃度非常高并且細胞彼此多層地上下重疊的情況下，沿著熒光激發光的光軸在激發光附近存在的細胞也將會吸收激發光。因此，在離激發光較遠側的細胞上無法達到足夠多的激發光，其結果，產生所得的熒光值與實際的細胞數相比被低估的問題。由于這些因素，難以準確地求得樣品中的DNA總量。

另外，在通過對染色區域的個數進行計數來求得細胞核的個數的情況下，會出現以下問題。也就是說，盡管原來是一個細胞核，但是當其細胞核被分裂為兩個時，所得的細胞核的個數比實際多。相反地，盡管原來是兩個細胞核，但是當其兩個細胞核互相接觸或重疊而成為一個染色區域時，所得的細胞核的個數比實際少。如上所述，在對染色區域進行計數的情況下，也難以準確地求得細胞核的個數(以及DNA總量)。

上述的問題不僅存在于求得生物體樣品中的細胞核的個數(進一步為DNA總量)的情況，而且也存在于求得樣品中的其他的對象物的量的情況。