[發(fā)明專利]基于差分離子遷移譜-質(zhì)譜聯(lián)用的差向異構(gòu)體的分離方法

有效

• 申請(qǐng)?zhí)枺?/td>: 201910845986.5
• 申請(qǐng)日: 2019-09-09
• 公開(kāi)（公告）號(hào): CN110596228B
• 公開(kāi)（公告）日: 2020-06-02
• 發(fā)明（設(shè)計(jì)）人: 陳相峰;吳日;陳德華;楊敏莉;張峰
• 申請(qǐng)（專利權(quán)）人: 山東省分析測(cè)試中心
• 主分類號(hào): G01N27/62
• 分類號(hào): G01N27/62
• 代理公司: 濟(jì)南知來(lái)知識(shí)產(chǎn)權(quán)代理事務(wù)所(普通合伙) 37276
• 代理人: 曹麗

本公開(kāi)建立了一種基于差分離子遷移?質(zhì)譜聯(lián)用的O?糖基化肽段差向異構(gòu)體的分離和鑒定方法，屬于生物醫(yī)藥和食品/保健品的檢測(cè)和分析領(lǐng)域。本公開(kāi)的方法能夠檢測(cè)O?乙酰氨基葡萄糖化的差向異構(gòu)體蛋白質(zhì)或多肽，這為研發(fā)治療神經(jīng)性系統(tǒng)疾病等的新藥奠定了良好的基礎(chǔ)，同樣的，在生物醫(yī)藥和食品/保健品分析領(lǐng)域中具有十分重要的意義。而且本公開(kāi)首次使用差分離子遷移譜?質(zhì)譜聯(lián)用的技術(shù)實(shí)現(xiàn)了生物體中十分重要的物質(zhì)?O?糖基化蛋白質(zhì)或肽段的分離和識(shí)別，推動(dòng)了生物大分子O?糖基化蛋白質(zhì)或肽段的鑒定技術(shù)的發(fā)展。

技術(shù)領(lǐng)域

本公開(kāi)涉及一種基于差分離子遷移譜-質(zhì)譜聯(lián)用的差向異構(gòu)體的分離方法，屬于生物醫(yī)藥和食品/保健品的檢測(cè)分析領(lǐng)域。

背景技術(shù)

公開(kāi)該背景技術(shù)部分的信息僅僅旨在增加對(duì)本公開(kāi)的總體背景的理解，而不必然被視為承認(rèn)或以任何形式暗示該信息構(gòu)成已經(jīng)成為本領(lǐng)域一般技術(shù)人員所公知的現(xiàn)有技術(shù)。

在生物體中，蛋白質(zhì)糖基化是一種細(xì)胞中廣泛存在、復(fù)雜的蛋白質(zhì)翻譯后修飾，大約有50％的人類蛋白質(zhì)分子是糖基化的。糖基化對(duì)蛋白質(zhì)的結(jié)構(gòu)和功能有著重要影響，比如，免疫系統(tǒng)中幾乎所有的關(guān)鍵分子都是糖蛋白，免疫球蛋白糖鏈異常是自身免疫疾病的元兇；透明帶糖蛋白ZP3決定了卵子與精子的結(jié)合，其糖鏈?zhǔn)蔷?卵結(jié)合的牽線人；等等。

糖基化類型主要可分為兩種：N-糖基化和O-糖基化，而其中，O-糖基化包含有一個(gè)單糖單元在細(xì)胞功能和失調(diào)方面具有重要的作用，比如，蛋白質(zhì)的O-乙酰氨基葡萄糖化被發(fā)現(xiàn)參與多個(gè)信號(hào)網(wǎng)絡(luò)，與神經(jīng)性系統(tǒng)疾病(比如阿茲海默氏癥等)、自身免疫性疾病等疾病密切相關(guān)?？梢?jiàn)，對(duì)于糖蛋白的研究具有十分重要的生物學(xué)意義和臨床應(yīng)用價(jià)值，尤其是研究作為生物醫(yī)藥等的復(fù)合糖蛋白/肽。

目前，復(fù)合糖立體化學(xué)的鑒定歸屬基于所有去糖基化酶和具有嚴(yán)格的底物特異性。但是最新的研究表明，pp-α-GanT2肽能夠介導(dǎo)生物合成含有乙酰基葡糖胺和乙?；肴樘前窔埢牟钕虍悩?gòu)糖肽。在藥物和食品/保健品領(lǐng)域，這種差向異構(gòu)糖肽往往只有一種形式是具有活性的，或者是不同差向異構(gòu)糖肽具有不同的功能活性的，或者是只有一種形式能表征藥物療效的，所以在實(shí)際中，需要準(zhǔn)確分離、識(shí)別非目的差向異構(gòu)糖肽是否存在以及測(cè)定其含量等。所以為了避免對(duì)于糖肽結(jié)構(gòu)的錯(cuò)判等問(wèn)題，需要開(kāi)發(fā)快速和/或高靈敏度的復(fù)合糖差向異構(gòu)體的區(qū)分方法。目前，基于質(zhì)譜的糖肽和糖蛋白中糖基團(tuán)的歸屬和定位作為主要的手段，仍然存在技術(shù)挑戰(zhàn)。多種串聯(lián)質(zhì)譜技術(shù)，包括碰撞裂解，電子捕獲裂解和電子誘導(dǎo)裂解，電子轉(zhuǎn)運(yùn)裂解，以及復(fù)合裂解技術(shù)，被用來(lái)進(jìn)行糖基化修飾位點(diǎn)的定位。但是，包含單個(gè)差向異構(gòu)單糖的非對(duì)映復(fù)合糖異構(gòu)體仍然不能通過(guò)質(zhì)譜進(jìn)行區(qū)分。

發(fā)明內(nèi)容

針對(duì)以上背景技術(shù)，本公開(kāi)建立了一種基于差分離子遷移-質(zhì)譜聯(lián)用的O-糖基化肽段差向異構(gòu)體的分離和鑒定方法。通過(guò)在差分離子遷移譜注入微量的揮發(fā)性有機(jī)調(diào)節(jié)劑，實(shí)現(xiàn)了糖肽差向異構(gòu)體的基線分離，為實(shí)現(xiàn)糖肽差向異構(gòu)體的完全分離奠定基礎(chǔ)，在生物醫(yī)藥和食品/保健品分析領(lǐng)域中具有十分重要的意義。

具體的，本公開(kāi)采用以下技術(shù)方案：

在本公開(kāi)的第一個(gè)方面，提供一種O-糖基化肽段差向異構(gòu)體的分離方法，該方法包括：

以含有至少兩種互為O-糖基化肽段差向異構(gòu)體的混合物為待分析樣品，采用差分離子遷移譜技術(shù)進(jìn)行分離；其中，以正丙醇(又稱1-丙醇)、正丁醇(又稱1-丁醇)、乙腈或1-丙硫醇為氣體調(diào)節(jié)劑。

在本公開(kāi)的第二個(gè)方面，提供一種O-糖基化肽段差向異構(gòu)體的檢測(cè)分析方法，該方法包括：

以含有至少兩種互為O-糖基化肽段差向異構(gòu)體的混合物為待分析樣品，采用差分離子遷移譜-質(zhì)譜聯(lián)用進(jìn)行分離；其中，以正丙醇、正丁醇、乙腈或1-丙硫醇為氣體調(diào)節(jié)劑。

在本公開(kāi)的第三個(gè)方面，提供一種判斷是否含有O-糖基化肽段差向異構(gòu)體的方法，該方法包括：