[發明專利]基于差分離子遷移譜-質譜聯用的差向異構體的分離方法

有效

• 申請號: 201910845986.5
• 申請日: 2019-09-09
• 公開（公告）號: CN110596228B
• 公開（公告）日: 2020-06-02
• 發明（設計）人: 陳相峰;吳日;陳德華;楊敏莉;張峰
• 申請（專利權）人: 山東省分析測試中心
• 主分類號: G01N27/62
• 分類號: G01N27/62
• 代理公司: 濟南知來知識產權代理事務所(普通合伙) 37276
• 代理人: 曹麗

1.一種O-糖基化肽段差向異構體的分離方法，其特征是，該方法包括：

以含有至少兩種互為O-糖基化肽段差向異構體的混合物為待分析樣品，采用差分離子遷移譜技術進行分離；

所述差分離子遷移譜技術的參數為：采用平板型電極，氣體調節劑的濃度為0.2~0.5%；

當待分析樣品為包含葡萄糖、半乳糖和/或甘露糖的O-糖基蛋白質或肽段時，氣體調節劑選擇為正丙醇。

2.如權利要求1所述的方法，其特征是，O-糖基化肽段為一個單糖和一段多肽通過O-糖肽鍵形成的包含單個差向異構單糖的非對映復合糖異構體。

3.如權利要求2所述的方法，其特征是，所述單糖為葡萄糖、甘露糖、半乳糖、阿洛糖、乙酰氨基葡萄糖、乙酰氨基甘露糖、乙酰氨基半乳糖或者乙酰氨基阿洛糖。

4.如權利要求2所述的方法，其特征是，所述多肽的長度為2~100個氨基酸分子。

5.如權利要求4所述的方法，其特征是，所述多肽的長度為2~50個氨基酸分子。

6.如權利要求1所述的方法，其特征是，所述差分離子遷移譜技術中，采用電噴霧離子源、正離子模式。

7.如權利要求6所述的方法，其特征是，電噴霧電壓為3.0~3.5 kV。

8.如權利要求1所述的方法，其特征是，所述差分離子遷移譜技術的參數為：平板間距為1 .4mm，長度為80mm，寬度為20mm，補償電壓的掃描范圍為-50V～+100V，色散場常數設置為127Td。

9.如權利要求8所述的方法，其特征是，進樣量為20μL。

10.如權利要求8所述的方法，其特征是，待分析樣品的進樣速度為0.4~0.6μL/min。

11.如權利要求1所述的方法，其特征是，氣體調節劑的濃度為0.45 %。

12.一種O-糖基化肽段差向異構體的檢測分析方法，其特征是，該方法包括：

以含有至少兩種互為O-糖基化肽段差向異構體的混合物為待分析樣品，采用差分離子遷移譜-質譜聯用進行分離和鑒定；

差分離子遷移譜技術的參數為：采用平板型電極，氣體調節劑的濃度為0.2~0.5%；

當待分析樣品為包含葡萄糖、半乳糖和/或甘露糖的O-糖基蛋白質或肽段時，氣體調節劑選擇為正丙醇。

13.如權利要求12所述的檢測分析方法，其特征是，質譜的參數為：電噴霧電壓為3.0~3.5 kV，選擇離子模式選擇糖肽的質子化母離子 [M+H]⁺：1238.62，采集其質譜信號，離子源的進樣流速為：0.5μL/min，加熱氮氣的溫度為220℃，離子在六極桿中的累積時間為0.5s。

14.一種判斷是否含有O-糖基化肽段差向異構體的方法，其特征是，該方法包括：

以懷疑含有O-糖基化肽段差向異構體的分析物為待分析樣品，采用差分離子遷移譜進行判斷；

差分離子遷移譜技術的參數為：采用平板型電極，氣體調節劑的濃度為0.2~0.5%；

當待分析樣品為包含葡萄糖、半乳糖和/或甘露糖的O-糖基肽段時，氣體調節劑選擇為正丙醇。

15.一種O-糖基化蛋白質差向異構體的分離或鑒定方法，其特征是：該方法包括：

以含有至少兩種互為O-糖基化蛋白質差向異構體的混合物為待分析樣品，對待分析樣品進行預處理，產生含有至少兩種互為O-糖基化肽段差向異構體的多種肽段混合液；然后采用權利要求1~11中任一項所述的O-糖基化肽段差向異構體的分離方法或權利要求12或13所述的檢測分析方法進行操作，即可實現O-糖基化蛋白質差向異構體的分離或鑒定。

16.一種判斷是否含有O-糖基化蛋白質差向異構體的方法，其特征是，該方法包括：

以懷疑含有O-糖基化蛋白質差向異構體的混合物為待分析樣品，對待分析樣品進行預處理，產生含有至少兩種互為O-糖基化肽段差向異構體的多種肽段混合液；采用差分離子遷移譜進行判斷；

差分離子遷移譜技術的參數為：采用平板型電極，氣體調節劑的濃度為0.2~0.5%；

當待分析樣品為包含葡萄糖、半乳糖和/或甘露糖的O-糖基蛋白質時，氣體調節劑選擇為正丙醇。