[發明專利]一種豬偽狂犬病病毒基因缺失毒株及其構建方法和應用

有效

• 申請號: 201910840948.0
• 申請日: 2019-09-06
• 公開（公告）號: CN110527669B
• 公開（公告）日: 2021-07-06
• 發明（設計）人: 李玲;張彤;吳冬荀;馬良;李靜;王飛;向王震;張欣;張國棟;肖進;黃書林;許磊;齊鵬
• 申請（專利權）人: 中牧實業股份有限公司
• 主分類號: C12N7/00
• 分類號: C12N7/00;C12N7/04;C12N15/869;A61K39/245;A61P31/22;C12R1/93
• 代理公司: 北京惟誠致遠知識產權代理事務所(普通合伙) 11536
• 代理人: 王慧鳳

本發明公開了一種豬偽狂犬病病毒變異株基因缺失毒株及其構建方法和應用。該豬偽狂犬病病毒變異株基因缺失毒株是以豬偽狂犬病病毒變異株PRV HNxy為親本毒株，使其gI、gE、US9和US2蛋白失活而獲得的減毒株。本發明豬偽狂犬病病毒變異株的基因缺失毒株可制備成活疫苗或滅活疫苗，對豬偽狂犬病具有很好的免疫保護效果，接種豬只沒有出現任何臨床癥狀，安全性高，適于作為防控偽狂犬病的疫苗候選株。

技術領域

發明涉及一種豬偽狂犬病病毒基因缺失毒株的構建，還涉及該基因缺失毒株在制備和防治偽狂犬病中的應用，屬于基因工程技術和病毒學領域。

背景技術

豬偽狂犬病是由偽狂犬病毒(pseudorabies virus,PRV)或者說豬皰疹病毒1型(suid herpesvirus 1,SuHV-1)感染豬或其他動物引起的高死亡率的急性傳染病，是嚴重危害我國養豬業的重大疫病之一。PRV是雙鏈線狀DNA病毒，基因組大約150kb，含有特異的UL和US區域、末端重復序列和內部重復序列。

PRV能夠感染哺乳動物(包括反芻動物、肉食動物和嚙齒類)，但是豬是唯一能夠潛伏攜帶該病毒的動物。感染了PRV的豬體，其臨床表現和死亡亞臨床癥狀不同：PRV感染對新出生的小豬和其他易危物種都是致死的，并且是死于中樞神經系統疾病；相反地，年長的豬體發展成為主要的呼吸系統癥狀；跟α-皰疹病毒一樣，PRV通常在宿主的周圍神經系統建立終身潛伏感染，當潛伏的病毒基因組自發或者通過應激和病毒出芽觸發而被再次激活，潛伏感染的動物將成為再次感染的源頭；PRV感染懷孕的母豬后可能會導致生殖障礙，比如流產或者死胎。

從2011年以來，國內許多免疫了Bartha-K61的豬群出現了PRV新的變種，免疫和攻毒實驗結果表明傳統的Bartha-K61疫苗株已不再能夠對當前的PRV變種提供完全保護。

發明內容

發明人對變種分離株與之前的包括Bartha-K61在內的PRV毒株基因組進行比對和分析，發現大多數的病毒蛋白出現了基因替換、插入或缺失，這暗示著當前的PRV流行分離株發生了變異。當前，市場急切需要基于現有流行毒株開發的PRV疫苗。

為了解決當前市場缺乏偽狂犬病病毒變異株疫苗不足的現狀，本發明的目的之一是提供一株與當前流行變異株同源性很高，能代表當前流行變異特點，與豬偽狂犬病病毒經典株差異明顯的強毒株。該毒株可作為基因改造的親本毒株，為開發針對流行毒株的PRV疫苗提供親本材料。

本發明的親本毒株豬偽狂犬病毒PRV HNxy是2016年從中國河南信陽某豬場免疫Bartha-K61疫苗后發病的豬腦組織中分離得到的。該毒株與當前流行的豬偽狂犬病病毒變異株同源性很高，但是與豬偽狂犬病病毒經典株差異明顯，gE基因第316位氨基酸為蘇氨酸，在第48位和494位氨基酸分別突變插入一個天冬氨酸。動物實驗結果表明，PRV HNxy株對小鼠和仔豬都表現出強致死性；仔豬感染PRV HNxy株后，出現豬偽狂犬病典型癥狀。

該豬偽狂犬病毒PRV HNxy已于2019年05越29日保藏于中國微生物菌種保藏委員會普通微生物中心(地址：北京市朝陽區北辰西路1號院3號)保藏，包保藏編號為CGMCCNo.17696。

本發明的另一個目的是提供一株基于上述豬偽狂犬病毒PRV HNxy經基因工程方法構建的缺失gI、gE、US9和US2基因的豬偽狂犬病病毒變異株基因缺失毒株。該毒株為針對當前流行的豬偽狂犬病病毒強毒株變異株的弱毒株，可用于制備PRV疫苗。

本發明的豬偽狂犬病病毒變異株基因缺失毒株是以豬偽狂犬病病毒變異株HNxy為出發毒株，使其gI、gE、US9和US2蛋白失活獲得的減毒株。其中，所述gI基因序列如序列表中序列1所示；所述gE基因序列如序列表中序列2所示；所述US9基因序列如序列表中序列3所示；所述US2基因序列如序列表中序列4所示。