[發明專利]一種豬偽狂犬病病毒基因缺失毒株及其構建方法和應用

有效

• 申請號: 201910840948.0
• 申請日: 2019-09-06
• 公開（公告）號: CN110527669B
• 公開（公告）日: 2021-07-06
• 發明（設計）人: 李玲;張彤;吳冬荀;馬良;李靜;王飛;向王震;張欣;張國棟;肖進;黃書林;許磊;齊鵬
• 申請（專利權）人: 中牧實業股份有限公司
• 主分類號: C12N7/00
• 分類號: C12N7/00;C12N7/04;C12N15/869;A61K39/245;A61P31/22;C12R1/93
• 代理公司: 北京惟誠致遠知識產權代理事務所(普通合伙) 11536
• 代理人: 王慧鳳

1.一株豬偽狂犬病毒（pseudorabies virus）變異強毒株，命名為PRV HNxy，保藏在中國微生物菌種保藏管理委員會普通微生物中心，其菌種保藏編號為CGMCC No. 17696。

2.一株豬偽狂犬病病毒變異株的基因缺失毒株，所述豬偽狂犬病病毒變異株的基因缺失毒株名稱為HNxy-ΔgIgE，該毒株在中國微生物菌種保藏管理委員會普通微生物保藏中心保藏，保藏編號為CGMCC No. 16900。

3.權利要求2所述的豬偽狂犬病病毒變異株HNxy株的基因缺失毒株的構建方法，其特征在于，該毒株的構建步驟為：

(1)轉移質粒的構建，以pCloneEZ載體為骨架載體，構建轉移載體：在pCloneEZ載體中插入權利要求1所述的豬偽狂犬病病毒變異株PRV HNxy株基因組中gI基因缺失位點之前的部分序列作為左同源臂、US2基因缺失位點之后的部分序列作為右同源臂，左右同源臂間插入EGFP基因表達框；

(2)表達Cre重組酶的真核表達質粒pCDNA3.1-Cre的構建，以pCDNA3.1載體為骨架載體，插入重組酶Cre的表達框；

(3)綠色熒光標記的缺失病毒的構建，轉移載體pCloneEZ-gI-EGFP-US2轉染經親本HNxy病毒感染的Vero細胞，通過蝕斑篩選，獲得表達綠色熒光蛋白的缺失病毒PRV HNxy-ΔgIgE-EGFP；

(4)豬偽狂犬病病毒變異株HNxy株的基因缺失毒株的構建，表達Cre重組酶的真核表達質粒pCDNA3.1-Cre轉染經缺失病毒PRV HNxy-ΔgIgE-EGFP感染的PK-15細胞，通過蝕斑篩選，獲得HNxy變異株缺失病毒PRV HNxy-ΔgIgE；

所述步驟（1）中，所述左同源臂的序列為序列表中序列5，所述右同源臂的序列為序列表中序列6。

4.一種疫苗組合物，其特征在于，由權利要求2所述的豬偽狂犬病病毒基因缺失疫苗株和藥學上可接受的佐劑組成。

5.權利要求2所述的豬偽狂犬病病毒基因缺失疫苗株在制備預防豬偽狂犬病疫苗中的應用。

6.權利要求2所述的豬偽狂犬病病毒基因缺失疫苗株在制備診斷或檢測豬偽狂犬病試劑中的應用。