[發(fā)明專利]一種高效液相色譜-串聯(lián)質(zhì)譜法檢測模擬美拉德反應(yīng)體系中α-二羰基化合物的方法

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• 申請?zhí)枺?/td>: 201910840510.2
• 申請日: 2019-09-06
• 公開（公告）號: CN110672735A
• 公開（公告）日: 2020-01-10
• 發(fā)明（設(shè)計(jì)）人: 王碩;莊園;王書軍;張燕;崔梅梅
• 申請（專利權(quán)）人: 天津科技大學(xué)
• 主分類號: G01N30/02
• 分類號: G01N30/02;G01N30/06;G01N30/34;G01N30/72
• 代理公司: 12229 天津合正知識(shí)產(chǎn)權(quán)代理有限公司
• 代理人: 郭樂

本發(fā)明公開了一種高效液相色譜?串聯(lián)質(zhì)譜法檢測模擬美拉德反應(yīng)體系中α?二羰基化合物的方法，包括如下步驟(1)樣品制備及預(yù)處理；(2)進(jìn)樣，按以下色譜條件和質(zhì)譜條件進(jìn)行檢測，色譜條件：色譜柱：2×150mm,4μm,Phenomenex，流動(dòng)相為0.1％的甲酸水溶液和甲醇，梯度洗脫的分離模式；質(zhì)譜條件：可加熱的電噴霧離子源；采用正離子掃描模式；霧化氣和碰撞氣是氮?dú)猓F化氣壓力40psi，毛細(xì)管電壓4000V，干燥器溫度350℃，干燥器流量是10L/min，檢測模式是多反應(yīng)檢測。

技術(shù)領(lǐng)域

本發(fā)明屬于食品學(xué)檢驗(yàn)領(lǐng)域，特別涉及一種高效液相色譜-串聯(lián)質(zhì)譜法檢測模擬美拉德反應(yīng)體系中α-二羰基化合物的方法。

背景技術(shù)

美拉德反應(yīng)是廣泛存在于食品工業(yè)的一種非酶褐變，是羰基化合物(還原糖類)和氨基化合物(氨基酸和蛋白質(zhì))間的反應(yīng)，經(jīng)過復(fù)雜的歷程最終生成棕色甚至是黑色的大分子物質(zhì)類黑精或稱擬黑素，所以又稱羰氨反應(yīng)。食品中常見的四種α-二羰基化合物是3-脫氧葡糖醛酮、2,3-丁二酮、丙酮醛和乙二醛。自從上個(gè)世紀(jì)以來，α-二羰基化合物在食品化學(xué)和藥物科學(xué)方面引起了極大地重視。α-二羰基化合物是美拉德反應(yīng)中間產(chǎn)物，不僅是形成顏色和風(fēng)味的前體物，也易與蛋白質(zhì)中的N-末基、賴氨酸和精氨酸端的側(cè)鏈反應(yīng)形成糖基化終產(chǎn)物(AGEs)，不僅影響蛋白質(zhì)的營養(yǎng)價(jià)值，也會(huì)對人體造成損害，除此之外，有些二羰基化合物本身也具有細(xì)胞毒性。

二羰基化合物是食品加工過程中由于焦糖化反應(yīng)或美拉德反應(yīng)產(chǎn)生的，由于其具有雙羰基的結(jié)構(gòu)，具有很高的反應(yīng)活性，易與多肽或蛋白質(zhì)的N-末端，賴氨酸、精氨酸殘基等發(fā)生反應(yīng)，形成晚期糖基化終產(chǎn)物(AGEs)，這些結(jié)合不僅改變了蛋白質(zhì)的物化、生化特征，使?fàn)I養(yǎng)價(jià)值流失，也與糖尿病及其并發(fā)癥的形成有很大關(guān)系。臨床醫(yī)學(xué)研究表明AGEs主要存在于糖尿病及其并發(fā)癥病人的神經(jīng)組織和細(xì)胞中，其含量隨著病情的加重而增加。已有研究表明，AGEs會(huì)產(chǎn)生氧化應(yīng)激，內(nèi)源性的AGEs會(huì)使平滑肌細(xì)胞產(chǎn)生趨化轉(zhuǎn)移，進(jìn)而加速晚期動(dòng)脈粥樣硬化的發(fā)生。

除與蛋白結(jié)合形成AGEs外，二羰基化合物也被發(fā)現(xiàn)與DNA結(jié)合。早在1966年，Robert Shapiro就發(fā)現(xiàn)并分離了乙二醛與鳥苷酸的加和物，之后，又有其他研究者詳細(xì)研究報(bào)道了鳥苷與丙酮醛、乙二醛的加和物，并對結(jié)構(gòu)特征進(jìn)行了詳細(xì)的闡述。Swati S.More首次用化學(xué)方法鑒定了丁二酮與2-脫氧鳥苷的結(jié)構(gòu)，丁二酮會(huì)與核酸鏈的鳥苷殘基加和，這種加合物的形成，會(huì)導(dǎo)致SH-SY5Y細(xì)胞的凋亡((IC50＝0.114±0.0421mM)。

由于二羰基化合物本身沒有紫外和熒光吸收，所以需要進(jìn)行衍生化反應(yīng)。以熒光為檢測器測定二羰基化合物常用的衍生劑為TRI及DAP，分別形成存在熒光吸收的蝶啶和吡嗪結(jié)構(gòu)。但是其與鄰苯二胺捕獲劑的反應(yīng)效果相比，氨基胍反應(yīng)低，不能滿足測定的要求，鄰苯二胺的反應(yīng)活性高一些。但目前方法中使用的鄰苯二胺與二羰基化合物反應(yīng)時(shí)間較長。

目前，二羰基化合物的檢測一般有氣相色譜法、氣相色譜質(zhì)譜法、高效液相色譜法、液相色譜質(zhì)譜法等。