[發明專利]一種微生物發酵提取楊梅素的方法

有效

• 申請號: 201910838747.7
• 申請日: 2019-09-05
• 公開（公告）號: CN110628840B
• 公開（公告）日: 2021-07-30
• 發明（設計）人: 王明謙;紀東藝;姚恩琪
• 申請（專利權）人: 寧波德康生物制品有限公司
• 主分類號: C12P17/06
• 分類號: C12P17/06;C12R1/225;C12R1/685
• 代理公司: 寧波市鄞州盛飛專利代理事務所(特殊普通合伙) 33243
• 代理人: 王玲華;邢麗艷

本發明屬于天然產物分離技術領域，涉及一種微生物發酵提取楊梅素的方法。所述方法包括以下步驟：1)制備含有黑曲霉孢子懸浮液和乳酸桿菌懸浮液的共固定化凝膠珠；2)將楊梅素提取原料搗碎，加乙醇回流提取1?5次，濾液合并并濃縮，濾渣干燥；3)向發酵罐中加水并加入步驟1)中的共固定化凝膠珠、步驟2)中的提取物以及1/5?4/5干燥濾渣，40?50℃下發酵提取140?170h；4)發酵結束后，用篩網過濾發酵液，除去共固定化凝膠珠；5)過濾后的發酵液用乙醇回流提取1?5次，合并濾液濃縮，得沉淀物；6)沉淀物反復水洗4～6次，得成品。該提取方法大大提高楊梅素收率和純度，并且綠色環保安全。

技術領域

本發明屬于天然產物分離技術領域，涉及一種微生物發酵提取楊梅素的方法。

背景技術

楊梅素[3，5，7-三羥基-2-(3，4，5-三羥基苯基)-4H-1-苯并呋喃-4-酮，Myricetin]又名楊梅樹皮素、楊梅黃酮、楊梅酮、楊梅黃素，是一種多羥基黃酮醇化合物，黃色針狀結晶，熔點為324.0～325.5℃，易溶于甲醇、乙醇、丙酮、乙酸乙酯，微溶于水，難溶于氯仿、石油醚。現代藥理學研究表明，楊梅素具有抗炎鎮痛、抗腫瘤、降血糖、保肝和抗氧化等多種藥理活性，尤其在防治心血管疾病方面作用明顯。鑒于其優異的抗氧化功能及降低膽固醇等作用，從植物中提取楊梅素已成為研究熱點。

楊梅素廣泛分布于楊梅科、葡萄科、豆科、杜鵑花科和大戟科等多科植物中，而其中以楊梅科和葡萄科植物為代表植物。我國的楊梅資源非常豐富，其中非果部位(枝、葉、皮)目前幾乎處于閑置和荒廢狀態，從楊梅植物非果部分中提取楊梅素，對這些非果部分進行有效利用具有良好的生態及經濟價值。

楊梅素存在于細胞內含物中，提取方法一般是利用酒精良好的穿透性，將其溶出細胞外。如鄧丹雯等人(鄧丹雯，楊佩，呂建壵，等.楊梅素提取工藝優化[J].食品與發酵工業，2013(3))研究的利用乙醇從楊梅枝中提取楊梅素的工藝，最佳提取工藝為提取溫度84.86℃、乙醇體積分數82.09％、液料比為12.82∶1、提取時間1.5h，在此條件下，楊梅素的提取得率依舊非常低，僅為1.355％。這是因為楊梅枝等植物中存在大量的纖維，細胞壁也是由木質素、纖維素及果膠等成分構成，它們都會影響楊梅素的溶出率，進而降低楊梅素的提取效率；而且楊梅素多以楊梅苷的形式存在于天然植物中，單純的乙醇提取，并不能將植物中楊梅苷轉換為楊梅素，故而楊梅素提取率低。中國專利申請(公開號CN107721963A)公開了一種從楊梅樹皮中提取分離楊梅素的方法，利用鹽酸、硫酸或者硝酸將提取到的楊梅苷加熱水解脫苷形成楊梅素，從而提高最終楊梅素的得率。但是這些強酸都是易污染環境的工業原料，安全性也不高，而且強酸水解楊梅苷后的殘留物質很難去除，降低楊梅素純度。

發明內容

本發明針對現有技術中楊梅素提取工藝的不足，采用微生物發酵提取法代替傳統的硫酸或鹽酸提取法，提高楊梅素的提取得率和純度，且提取方法綠色環保無污染。

本發明的一個目的通過以下技術方案來實現：

一種微生物發酵提取楊梅素的方法，其特征在于，所述方法包括以下步驟：

1)制備共固定化凝膠珠：將黑曲霉孢子懸浮液和乳酸桿菌懸浮液混合后，加入至海藻酸鈉溶液中，采用注射劑將形成的混合液滴入至CaCl₂溶液中，形成共固定化凝膠珠；

2)將楊梅素提取原料搗碎，加乙醇回流提取1-5次，合并濾液加壓濃縮或者減壓濃縮除去乙醇，得到提取物，濾渣干燥；

3)向發酵罐中加水并加入步驟1)中的共固定化凝膠珠、步驟2)中的提取物以及1/5-4/5干燥濾渣，40-50℃下發酵提取140-170h；

4)發酵結束后，用篩網過濾發酵液，除去共固定化凝膠珠；

5)過濾后的發酵液用乙醇回流提取1-5次，合并濾液減壓濃縮除去乙醇，得沉淀物；

6)沉淀物反復水洗4～6次，得成品。