[發明專利]一種L-蘇氨酸醛縮酶及其在對甲砜基苯絲氨酸合成中的應用

有效

• 申請號: 201910838613.5
• 申請日: 2019-09-05
• 公開（公告）號: CN110577948B
• 公開（公告）日: 2020-12-25
• 發明（設計）人: 林娟;王力超;許煉;陳承滔;賴凌燕
• 申請（專利權）人: 福建昌生生物科技發展有限公司
• 主分類號: C12N9/88
• 分類號: C12N9/88;C12N15/60;C12N15/70;C12N1/21;C12P13/04;C12R1/19
• 代理公司: 福州旭辰知識產權代理事務所(普通合伙) 35233
• 代理人: 程春寶

1.L-蘇氨酸醛縮酶在(2S, 3R)-對甲砜基苯絲氨酸合成中的應用，其特征在于：

L-蘇氨酸醛縮酶的編碼基因的核心序列如SEQID NO：2所示；通過基因工程構建含L-蘇氨酸醛縮酶的編碼基因的重組大腸桿菌細胞為L-蘇氨酸醛縮酶全細胞；

將L-蘇氨酸醛縮酶全細胞作為催化劑用于(2S,3R)-對甲砜基苯絲氨酸不對稱合成反應，所述合成反應的體系包括：對甲砜基苯甲醛、甘氨酸、磷酸吡哆醛、30%乙腈(v/v)的PBS緩沖液、以及L-蘇氨酸醛縮酶全細胞；各原料的質量摩爾濃度之比為對甲砜基苯甲醛∶甘氨酸∶磷酸吡哆醛=1-1.5∶2-3∶0.0001-0.0002，重組大腸桿菌全細胞濃度為10-13mg/mL；25℃-35℃下反應4-12h。

2.根據權利要求1所述的L-蘇氨酸醛縮酶在(2S,3R)-對甲砜基苯絲氨酸合成中的應用，其特征在于，所述L-蘇氨酸醛縮酶全細胞的制備方法包括：

S1、構建包含所述L-蘇氨酸醛縮酶編碼基因序列的重組表達質粒載體；

S2、將步驟S1中的重組表達質粒載體轉化至大腸桿菌的感受態細胞中，并培養過夜；

S3、收集步驟S2中培養后的大腸桿菌菌體，即獲得所述的L-蘇氨酸醛縮酶全細胞。

3.根據權利要求2所述的L-蘇氨酸醛縮酶在(2S,3R)-對甲砜基苯絲氨酸合成中的應用，其特征在于，所述(2S,3R)-對甲砜基苯絲氨酸不對稱催化合成反應體系的配置方法為：在反應容器中先加入磷酸鹽緩沖液，然后分別稱取對甲砜基苯甲醛、甘氨酸、磷酸吡哆醛并依次投入反應瓶中，充分混勻后，再加入重組大腸桿菌的全細胞，振蕩反應。

4.根據權利要求3所述的L-蘇氨酸醛縮酶在(2S,3R)-對甲砜基苯絲氨酸合成中的應用，其特征在于，所述L-蘇氨酸醛縮酶不對稱催化合成(2S,3R)-對甲砜基苯絲氨酸的反應體系達到預定的反應時間后，將反應液在8000-10000rpm離心3-6min，除去細胞沉淀，收集的上清液即為含有(2S,3R)-對甲砜基苯絲氨酸的催化產物。