[發(fā)明專利]一種乳腺癌骨轉(zhuǎn)移小鼠模型造模方法

有效

• 申請?zhí)枺?/td>: 201910829779.0
• 申請日: 2019-09-03
• 公開（公告）號: CN110484567A
• 公開（公告）日: 2019-11-22
• 發(fā)明（設(shè)計）人: 韓倩倩;王白燕;高劍峰;李寧;楊聯(lián)河;姜乃菡
• 申請（專利權(quán)）人: 河南中醫(yī)藥大學(xué)
• 主分類號: C12N15/867
• 分類號: C12N15/867;A01K67/027
• 代理公司: 32260 無錫市匯誠永信專利代理事務(wù)所(普通合伙)
• 代理人: 郭鴻賓<國際申請>=<國際公布>=<進入

本發(fā)明涉及一種乳腺癌骨轉(zhuǎn)移小鼠模型造模方法。該方法包括以下步驟：取小鼠，將用于誘導(dǎo)小鼠乳腺癌的慢病毒制劑對小鼠進行乳頭注射，將乳頭注射過慢病毒的小鼠以血液注射的形式注射用于誘導(dǎo)小鼠乳腺癌的慢病毒制劑若干次。首先使用用于誘導(dǎo)小鼠乳腺癌的慢病毒制劑對小鼠進行乳頭注射，使得小鼠產(chǎn)生原發(fā)腫瘤。之后將用于誘導(dǎo)小鼠乳腺癌的慢病毒制劑對小鼠進行血液注射，誘導(dǎo)原發(fā)腫瘤細(xì)胞向血液中移動，促使其形成骨轉(zhuǎn)移狀態(tài)。可促使小鼠的原發(fā)乳腺癌成功轉(zhuǎn)移至目標(biāo)位點。

技術(shù)領(lǐng)域

本發(fā)明屬于小鼠模型造模技術(shù)領(lǐng)域，具體涉及一種乳腺癌骨轉(zhuǎn)移小鼠模型造模方法。

背景技術(shù)

乳腺癌幾乎能擴散至身體的任何區(qū)域。最常見的位點是淋巴結(jié)、肺、骨和肝。目前，有關(guān)乳腺癌研究主要是以嚙齒類動物建立的乳腺癌模型。乳腺癌小鼠模型主要用于模擬乳腺癌的發(fā)生、發(fā)展以及用藥治療，為臨床治療乳腺癌提供相關(guān)依據(jù)。現(xiàn)有的乳腺癌動物模型主要可以分為3類：移植瘤模型、物理和化學(xué)致癌劑誘導(dǎo)動物產(chǎn)生腫瘤模型、轉(zhuǎn)基因模型。現(xiàn)有的乳腺癌小鼠模型多為原發(fā)位點，在原發(fā)位點上轉(zhuǎn)移的轉(zhuǎn)移的較少，使用單一方法誘導(dǎo)的乳腺癌細(xì)胞不易轉(zhuǎn)移至其他部位，因此，不便于模擬真實的乳腺癌轉(zhuǎn)移的情況。

發(fā)明內(nèi)容

本發(fā)明的目的是提供一種乳腺癌骨轉(zhuǎn)移小鼠模型造模方法，該乳腺癌骨轉(zhuǎn)移小鼠模型造模方法可誘導(dǎo)小鼠乳腺癌骨轉(zhuǎn)移，為乳腺癌骨轉(zhuǎn)移研究提供幫助。

為了實現(xiàn)以上目的，本發(fā)明采取的技術(shù)方案為：一種乳腺癌骨轉(zhuǎn)移小鼠模型造模方法，包括以下步驟：

1)取小鼠，將用于誘導(dǎo)小鼠乳腺癌的慢病毒制劑對小鼠進行乳頭注射；

2)將乳頭注射過慢病毒的小鼠以血液注射的形式注射用于誘導(dǎo)小鼠乳腺癌的慢病毒制劑若干次。

進一步地，所述血液注射誘導(dǎo)制劑與乳頭注射誘導(dǎo)制劑的時間間隔為1-7d，相鄰兩次血液注射誘導(dǎo)制劑的時間間隔為1-7d。

進一步地，所述慢病毒制劑的慢病毒載體為自行構(gòu)建或商品化的慢病毒載體，將慢病毒載體包裝后即可進行注射，慢病毒表達質(zhì)粒和包裝質(zhì)粒pRev、pMDL、pVSVG共同轉(zhuǎn)染HEK293T細(xì)胞，轉(zhuǎn)染3天后收集培養(yǎng)上清，離心過濾得到病毒顆粒，稀釋病毒后感染HEK293T細(xì)胞，之后測試病毒感染滴度。

進一步地，所述乳頭注射的劑量為10-20μL，血液注射的劑量為5-10μL。

進一步地，所述慢病毒制劑中帶有用于追蹤的示蹤染料，示蹤染料為綠色熒光染料。

進一步地，所述血液注射的方式是通過皮下注射或靜脈注射。

進一步地，所述乳頭注射是通過微量注射器將慢病毒制劑注入小鼠乳腺導(dǎo)管中。

進一步地，在乳頭注射過慢病毒的小鼠尾椎注射腫瘤細(xì)胞，腫瘤細(xì)胞為具有誘導(dǎo)小鼠乳腺癌作用的MCF-7細(xì)胞。

進一步地，用雙順反子表達載體pBTE中的修飾tet-反式激活蛋白對LacZ標(biāo)記的MCF-7細(xì)胞進行穩(wěn)定地轉(zhuǎn)染，之后用pTRE-hVEGF和一種賦予zeocin耐受性的質(zhì)粒pZeo-SV對表達tet-反式激活蛋白的細(xì)胞進行再轉(zhuǎn)染，培養(yǎng)細(xì)胞后即得具有誘導(dǎo)小鼠乳腺癌作用的MCF-7細(xì)胞。

本發(fā)明的有益效果：

本發(fā)明的乳腺癌骨轉(zhuǎn)移小鼠模型造模方法，首先使用用于誘導(dǎo)小鼠乳腺癌的慢病毒制劑對小鼠進行乳頭注射，使得小鼠產(chǎn)生原發(fā)腫瘤。之后將用于誘導(dǎo)小鼠乳腺癌的慢病毒制劑對小鼠進行血液注射，誘導(dǎo)原發(fā)腫瘤細(xì)胞向血液中移動，促使其形成骨轉(zhuǎn)移狀態(tài)。轉(zhuǎn)移過程由一系列步驟組成，其中腫瘤細(xì)胞從原發(fā)腫瘤滲漏到血液循環(huán)中，散布到激發(fā)位點，并且停滯在或侵入新器官，在靶器官環(huán)境中建群以形成肉眼可見的轉(zhuǎn)移瘤并且增殖以形成肉眼可見的轉(zhuǎn)移病變。本發(fā)明采用兩步法，可促使小鼠的原發(fā)乳腺癌成功轉(zhuǎn)移至目標(biāo)位點。