[發明專利]一種乳腺癌骨轉移小鼠模型造模方法

有效

• 申請號: 201910829779.0
• 申請日: 2019-09-03
• 公開（公告）號: CN110484567A
• 公開（公告）日: 2019-11-22
• 發明（設計）人: 韓倩倩;王白燕;高劍峰;李寧;楊聯河;姜乃菡
• 申請（專利權）人: 河南中醫藥大學
• 主分類號: C12N15/867
• 分類號: C12N15/867;A01K67/027
• 代理公司: 32260 無錫市匯誠永信專利代理事務所(普通合伙)
• 代理人: 郭鴻賓<國際申請>=<國際公布>=<進入

1.一種乳腺癌骨轉移小鼠模型造模方法，其特征在于，包括以下步驟：

1)取小鼠，將用于誘導小鼠乳腺癌的慢病毒制劑對小鼠進行乳頭注射；

2)將乳頭注射過慢病毒的小鼠以血液注射的形式注射用于誘導小鼠乳腺癌的慢病毒制劑若干次。

2.根據權利要求1所述的乳腺癌骨轉移小鼠模型造模方法，其特征在于，所述血液注射誘導制劑與乳頭注射誘導制劑的時間間隔為1-7d，相鄰兩次血液注射誘導制劑的時間間隔為1-7d。

3.根據權利要求1所述的乳腺癌骨轉移小鼠模型造模方法，其特征在于，所述慢病毒制劑的慢病毒載體為自行構建或商品化的慢病毒載體，將慢病毒載體包裝后即可進行注射，慢病毒表達質粒和包裝質粒pRev、pMDL、pVSVG共同轉染HEK293T細胞，轉染3天后收集培養上清，離心過濾得到病毒顆粒，稀釋病毒后感染HEK293T細胞，之后測試病毒感染滴度。

4.根據權利要求1所述的乳腺癌骨轉移小鼠模型造模方法，其特征在于，所述乳頭注射的劑量為10-20μL，血液注射的劑量為5-10μL。

5.根據權利要求1所述的乳腺癌骨轉移小鼠模型造模方法，其特征在于，所述慢病毒制劑中帶有用于追蹤的示蹤染料，示蹤染料為綠色熒光染料。

6.根據權利要求1所述的乳腺癌骨轉移小鼠模型造模方法，其特征在于，所述血液注射的方式是通過皮下注射或靜脈注射。

7.根據權利要求1所述的乳腺癌骨轉移小鼠模型造模方法，其特征在于，所述乳頭注射是通過微量注射器將慢病毒制劑注入小鼠乳腺導管中。

8.根據權利要求1所述的乳腺癌骨轉移小鼠模型造模方法，其特征在于，在乳頭注射過慢病毒的小鼠尾椎注射腫瘤細胞，腫瘤細胞為具有誘導小鼠乳腺癌作用的MCF-7細胞。

9.根據權利要求8所述的乳腺癌骨轉移小鼠模型造模方法，其特征在于，用雙順反子表達載體pBTE中的修飾tet-反式激活蛋白對LacZ標記的MCF-7細胞進行穩定地轉染，之后用pTRE-hVEGF和一種賦予zeocin耐受性的質粒pZeo-SV對表達tet-反式激活蛋白的細胞進行再轉染，培養細胞后即得具有誘導小鼠乳腺癌作用的MCF-7細胞。