[發明專利]鑒定番紅硨磲、鱗硨磲及其雜交子一代的微衛星引物、試劑盒和鑒定方法

有效

• 申請號: 201910829076.8
• 申請日: 2019-09-03
• 公開（公告）號: CN110551826B
• 公開（公告）日: 2021-07-27
• 發明（設計）人: 馬海濤;喻子牛;張躍環;鄧亞平;肖述
• 申請（專利權）人: 中國科學院南海海洋研究所
• 主分類號: C12Q1/6888
• 分類號: C12Q1/6888;C12Q1/6858;C12N15/11
• 代理公司: 廣州科粵專利商標代理有限公司 44001
• 代理人: 陳潔娣;劉明星

本發明公開了一種鑒定番紅硨磲、鱗硨磲及其雜交子一代的微衛星引物、試劑盒和鑒定方法。所述的微衛星引物TC111為：F:5'?CCATTTTGGTGCGTAGTA?3'；R:5'?CTTGAGGGCACCTTTTAG?3'。利用本發明方法，可以快速、準確地鑒定出番紅硨磲、鱗硨磲、番紅硨磲×鱗硨磲雜交子一代，具有重要的實際應用價值，同時本發明具有方法簡單、結果直觀、準確有效、不受環境及發育時期影響、成本低廉等優點。

技術領域

本發明屬于水產生物技術中的貝類分子標記和雜交種鑒定技術，具體涉及一種鑒定番紅硨磲、鱗硨磲及其雜交子一代的微衛星引物、試劑盒和鑒定方法。

背景技術

硨磲是一種大型海產雙殼類軟體動物，不僅肉味鮮美、營養豐富，而且貝殼可制作成精美的貝雕藝術品，具有極高的觀賞價值、收藏價值和藥用價值。近年來由于濫捕，硨磲資源受到嚴重的破壞，如庫氏硨磲在我國南海幾近絕跡，無磷硨磲也極為罕見，其他硨磲大多數也處于瀕危境地，因此開展硨磲的人工繁育及增值放流迫在眉睫。

番紅硨磲(Tridacna crocea)是個體較小的硨磲種類，外形呈卵圓狀，足絲孔較寬。番紅硨磲是水族館中優先選擇的觀賞種類且存在造礁、護礁功能，具有重要的經濟價值和生態價值。鱗硨磲(Tridacna squamosa)最大能生長至30-40cm，外殼有明顯棱鱗，由外殼邊緣成直行生長一直伸展至外殼底部，也是一種重要的造礁護礁生物。近年來，隨著我國硨磲野生資源的迅速減少和市場需求的不斷擴大，番紅硨磲和鱗硨磲將成為重要的養殖經濟種類。由于幼體階段的番紅硨磲和鱗硨磲根據形態特征難以區分，雜交種更加難以鑒別。急需一種簡單高效的方法對番紅硨磲、鱗硨磲及其雜交子一代進行大規模物種鑒定。

發明內容

本發明目的在于提供一種鑒定番紅硨磲、鱗硨磲及其雜交子一代的微衛星引物、試劑盒和鑒定方法。本發明中利用該方法對番紅硨磲、鱗硨磲及其雜交子一代各80個個體進行了分析并發現鑒定效果顯著。

本發明從100對番紅硨磲EST-SSR引物中篩選出1對微衛星(SSR)引物對番紅硨磲、鱗硨磲及其雜交子一代各80個個體的基因組DNA進行PCR擴增，通過擴增圖譜可以簡單高效的對真正雜交子一代進行分子鑒定，從而簡單高效地對番紅硨磲、鱗硨磲及其雜交子一代進行大規模物種鑒定。

本發明的第一個目的是提供鑒定番紅硨磲、鱗硨磲及其雜交子一代的微衛星引物TC111，所述的微衛星引物TC111為：

F:5'-CCATTTTGGTGCGTAGTA-3'(其核苷酸序列如SEQ ID NO.1所示)；

R:5'-CTTGAGGGCACCTTTTAG-3'(其核苷酸序列如SEQ ID NO.2所示)。

本發明的第二個目的是提供一種鑒定番紅硨磲、鱗硨磲及其雜交子一代的試劑盒，該試劑盒含有上述的微衛星引物TC111。

本發明的第三個目的是提供一種番紅硨磲、鱗硨磲及其雜交子一代的鑒定方法，包括以下步驟：

提取待測硨磲樣品的基因組DNA，然后用上述的微衛星引物TC111(F:5'-CCATTTTGGTGCGTAGTA-3'，R:5'-CTTGAGGGCACCTTTTAG-3')進行PCR擴增，將擴增產物進行電泳和染色，若在240bp～260bp區間內出現條帶，則該待測樣品為番紅硨磲；若在200bp～220bp區間內出現條帶，則該待測樣品為鱗硨磲；若同時在240bp～260bp區間和200bp～220bp區間內各出現1條帶，則該待測樣品為番紅硨磲與鱗硨磲雜交子一代。即同時擁有親本的1條特異性條帶的個體才為真正的番紅硨磲與鱗硨磲雜交子一代，缺少其中的任意一個條帶均為假雜種。