[發明專利]鑒定番紅硨磲、鱗硨磲及其雜交子一代的微衛星引物、試劑盒和鑒定方法

有效

• 申請號: 201910829076.8
• 申請日: 2019-09-03
• 公開（公告）號: CN110551826B
• 公開（公告）日: 2021-07-27
• 發明（設計）人: 馬海濤;喻子牛;張躍環;鄧亞平;肖述
• 申請（專利權）人: 中國科學院南海海洋研究所
• 主分類號: C12Q1/6888
• 分類號: C12Q1/6888;C12Q1/6858;C12N15/11
• 代理公司: 廣州科粵專利商標代理有限公司 44001
• 代理人: 陳潔娣;劉明星

1.鑒定番紅硨磲、鱗硨磲及其雜交子一代的微衛星引物TC111，其特征在于，所述的微衛星引物TC111為：

F: 5'-CCATTTTGGTGCGTAGTA-3'；

R: 5'-CTTGAGGGCACCTTTTAG-3'。

2.一種鑒定番紅硨磲、鱗硨磲及其雜交子一代的試劑盒，其特征在于，含有權利要求1所述的微衛星引物TC111。

3.一種番紅硨磲、鱗硨磲及其雜交子一代的鑒定方法，其特征在于，包括以下步驟：

提取待測硨磲樣品的基因組DNA，然后用權利要求1所述的微衛星引物TC111進行PCR擴增，將擴增產物進行電泳和染色，電泳結果判定方式如下：如果電泳結果為一條帶，且該條帶在240bp~260bp區間內，則該待測樣品為番紅硨磲；若電泳結果為一條帶，且該條帶在200bp~220bp區間內，則該待測樣品為鱗硨磲；若電泳結果為兩條帶，且條帶分別在240bp~260bp區間和200bp~220bp區間內，則該待測樣品為番紅硨磲與鱗硨磲雜交子一代。

4. 根據權利要求3所述的鑒定方法，其特征在于，所述的用微衛星引物TC111進行PCR擴增，其PCR擴增體系為：總體積為25 μL，其中各種成分及終濃度分別為：DNA模板50 ng，Buffer 10 mM，引物各 0.2 mM，dNTP 0.2 mM，Mg²⁺ 2.0 mM，Taq DNA聚合酶 1U，用滅菌水補足25 μL。

5. 根據權利要求3所述的鑒定方法，其特征在于，所述的用微衛星引物TC111進行PCR擴增，其PCR反應程序為：94℃預變性5 min，94℃變性30 s，50℃退火30 s，72℃延伸1 min，變性至延伸三個步驟重復30次，72℃延伸10 min。

6. 根據權利要求3所述的鑒定方法，其特征在于，所述的將擴增產物進行電泳和染色，是將擴增產物經8%非變性聚丙烯酰胺凝膠電泳，220V穩壓電泳3小時，然后用0.1% AgNO₃溶液染色10 min，銀染后用顯色液顯色至條帶清晰為止，所述的顯色液為2% NaOH、0.4%甲醛、0.2% NaS₂O₃、dH₂O定容至1000 mL。

7.權利要求1所述的微衛星引物TC111或權利要求2所述的試劑盒在鑒定番紅硨磲、鱗硨磲及其雜交子一代中的應用。