[發明專利]一種食用油中4種多環芳烴化合物的快速提取凈化方法及其檢測應用

有效

• 申請號: 201910823374.6
• 申請日: 2019-09-02
• 公開（公告）號: CN110609096B
• 公開（公告）日: 2022-03-11
• 發明（設計）人: 章再婷;楊亮;李雙;劉忠義;陳樹兵
• 申請（專利權）人: 寧波中盛產品檢測有限公司;寧波海關技術中心
• 主分類號: G01N30/02
• 分類號: G01N30/02;G01N30/06
• 代理公司: 寧波奧圣專利代理有限公司 33226
• 代理人: 何仲

1.一種食用油中4 種多環芳烴化合物的快速提取凈化方法，其特征在于包括以下步驟：

（1）稱取待測食用油樣品，依次加入提取液和脂肪酶，于37±2℃恒溫震蕩酶解1.5-2.5h后，加入碳酸鉀和乙醇，或碳酸鈉和乙醇，渦旋混勻，其中所述的提取液的配制方法如下：將磷酸二氫鉀溶于水中配制成濃度為0.108kg/L的磷酸二氫鉀溶液，用氫氧化鉀調pH至8.0；

（2）然后加入正己烷和水，震蕩4-6 min，以4000-5000 r/min離心4-6 min，分離得到上層有機相和下層水相；

（3）取下層水相按步驟（2）方法，重復萃取1次；合并兩次萃取所得上層有機相部分，混勻，40℃旋蒸至干，用乙腈復溶，過濾膜，得到含有苯并[a]蒽、苯并[b]熒蒽、苯并[k]熒蒽和苯并[a]芘4 種多環芳烴化合物的待測樣品。

2.根據權利要求1所述的一種食用油中4 種多環芳烴化合物的快速提取凈化方法，其特征在于：每克待測食用油樣品中提取液的添加量為2.5 mL，脂肪酶的添加量為0.1g，碳酸鉀的添加量為0.5g，乙醇的添加量為2.5mL，正己烷的添加量7.5 mL以及水的添加量為2.5mL。

3.根據權利要求2所述的一種食用油中4 種多環芳烴化合物的快速提取凈化方法，其特征在于：步驟（1）中酶解時間為2 h。

4.一種食用油中4 種多環芳烴化合物的快速檢測方法，其特征在于包括以下步驟：

（1）樣品前處理

A．稱取待測食用油樣品，依次加入提取液和脂肪酶，于37±2℃恒溫震蕩酶解1.5-2.5h后，加入碳酸鉀和乙醇，或者碳酸鈉和乙醇，渦旋混勻，其中所述的提取液的配制方法如下：將磷酸二氫鉀溶于水中配制成濃度為0.108kg/L的磷酸二氫鉀溶液，用氫氧化鉀調pH至8.0；每克待測食用油樣品中提取液的添加量為2.5 mL，脂肪酶的添加量為0.1g，碳酸鉀的添加量為0.5g，乙醇的添加量為2.5mL；

B．然后加入正己烷和水，震蕩4-6 min，以4000-5000 r/min離心4-6 min，分離得到上層有機相和下層水相，每克待測食用油樣品中正己烷的添加量為7.5 mL和水的添加量為2.5 mL；

C．取下層水相按步驟B方法，重復萃取1次；合并兩次萃取所得上層有機相部分，混勻，40℃旋蒸至干，用乙腈復溶，過0.22μm微孔濾膜得到含有苯并[a]蒽、苯并[b]熒蒽、苯并[k]熒蒽和苯并[a]芘4 種多環芳烴化合物的待測樣品，備用；

（2）標準曲線制作

分別用乙腈配制苯并[a]蒽、苯并[b]熒蒽、苯并[k]熒蒽和苯并[a]芘的一系列標準溶液，每一種多環芳烴化合物的系列標準溶液濃度均為0.1 ng/mL，0.5 ng/mL，1.0 ng/mL，2.0 ng/mL，5.0 ng/mL，以濃度為橫坐標，儀器響應值為縱坐標，制作標準曲線；

（3）液相色譜-熒光檢測

液相條件：Dikma Plus C18色譜柱或Hypersile Gold C18色譜柱，柱溫40℃，流動相A：水，流動相B：乙腈，流速：1.0 mL/min，梯度見下表1：

表1 HPLC洗脫程序

；

熒光檢測器，檢測波長見下表2：

表2 4種多環芳烴的熒光檢測參數

；

（4）待測樣品濃度計算：

樣品中4種多環芳烴待測物的含量根據如下計算公式得到：X=C*V/m，

式中：X－試樣中某一待測多環芳烴化合物含量，單位為μg/kg；

C－試樣處理液中該多環芳烴化合物濃度，根據該多環芳烴化合物的基質標準曲線計算得到，單位為μg/L；

V— 定容體積，單位為mL；

m－試樣體積或質量，單位為g。

5.根據權利要求4所述的一種食用油中4 種多環芳烴化合物的快速檢測方法，其特征在于：步驟（1）中酶解時間為2 h。