[發明專利]鑒定白菜與埃塞俄比亞芥種間雜種及后代材料A02和C02染色體分離情況的分子標記

有效

• 申請號: 201910822383.3
• 申請日: 2019-09-02
• 公開（公告）號: CN110499383B
• 公開（公告）日: 2022-05-31
• 發明（設計）人: 張曉輝;李錫香;宋江萍;王海平
• 申請（專利權）人: 中國農業科學院蔬菜花卉研究所
• 主分類號: C12Q1/6895
• 分類號: C12Q1/6895;C12N15/11
• 代理公司: 成都方圓聿聯專利代理事務所(普通合伙) 51241
• 代理人: 胡文莉

1.鑒定白菜和埃塞俄比亞芥種間雜種及追蹤其后代材料A02和C02染色體分離情況的SSR分子標記的引物C02B，引物C02B的前向引物序列如SEQ ID No.1所示，引物C02B的后向引物序列如SEQ ID No.2所示。

2.權利要求1所述的引物C02B在鑒定白菜和埃塞俄比亞芥種間雜種及追蹤其后代材料A02和C02染色體分離情況上的應用，其特征在于，用引物C02B作為PCR擴增的引物，以待鑒定的植株及白菜與埃塞俄比亞芥親本DNA為模板進行PCR擴增，檢測PCR擴增產物進行條帶統計和基因型分析，白菜帶型為247bp的擴增片段，埃塞俄比亞芥帶型為262bp的擴增片段。

3.根據權利要求2所述的應用，其特征在于，條帶統計和基因型分析的方法為：待鑒定的植株為白菜與埃塞俄比亞芥雜交的F₁植株時，若F₁植株共顯白菜帶型和埃塞俄比亞芥帶型，則該植株為真雜種；若檢測的F₁植株只顯示白菜帶型或只顯示埃塞俄比亞芥帶型，則該植株為假雜種。

4.根據權利要求2所述的應用，其特征在于，條帶統計和基因型分析的方法為：待鑒定的植株為白菜與埃塞俄比亞芥遠緣雜種自交后代植株時，若檢測的遠緣雜種自交后代植株共顯白菜帶型和埃塞俄比亞芥帶型，則該植株為白菜A02染色體和埃塞俄比亞芥C02染色體整條或部分雜合；若檢測的遠緣雜種自交后代植株只顯白菜帶型，則該植株不含埃塞俄比亞芥C02染色體整條或部分；若檢測的遠緣雜種自交后代植株只顯埃塞俄比亞芥帶型，則該植株不含白菜A02染色體整條或部分。

5.根據權利要求2所述的應用，其特征在于，條帶統計和基因型分析的方法為：待鑒定的植株為以白菜為回交親本的回交后代時，若檢測的植株共顯白菜帶型和埃塞俄比亞芥帶型，則該植株含有埃塞俄比亞芥C02染色體整條或部分；若只顯示白菜帶型，則該植株不含埃塞俄比亞芥C02染色體整條或部分。

6.根據權利要求2所述的應用，其特征在于，條帶統計和基因型分析的方法為：待鑒定的植株為以埃塞俄比亞芥為回交親本的回交后代時，若檢測的植株共顯白菜帶型和埃塞俄比亞芥帶型，則該植株含有白菜A02染色體整條或部分；若只顯示埃塞俄比亞芥帶型，則該植株不含白菜A02染色體整條或部分。

7.根據權利要求2-6任一項所述的應用，其特征在于，PCR擴增的反應體系：10-50μL，其中包括：1×PCR含Mg²⁺ Buffer，0.5-100 ng 模板DNA，0.2 mM dNTPs，0.5 μM SEQ IDNo.1primer，0.5 μM SEQ ID No.2 primer，1U Taq酶；PCR擴增的反應程序：94-95℃ 0.5-3min；94-95℃ 30s, 55-60℃ 30S, 72℃ 30S, 35循環; 72 ℃ 5-10 min。