[發明專利]一種珍珠貝小分子肽在皮膚創傷修復中的應用

在審

• 申請號: 201910813960.2
• 申請日: 2019-08-30
• 公開（公告）號: CN110624097A
• 公開（公告）日: 2019-12-31
• 發明（設計）人: 林海生;秦小明;章超樺;伍彬;曹文紅;高加龍;楊發明;蘇偉明;鄭惠娜
• 申請（專利權）人: 廣東海洋大學
• 主分類號: A61K38/01
• 分類號: A61K38/01;A61K38/39;A61K9/70;A61P17/02;A61P7/04;A61P31/04;A61P29/00;A61L15/22;A61L15/42;A61L15/44;A61L15/46;D04H1/728;D04H1/4309
• 代理公司: 11350 北京科億知識產權代理事務所(普通合伙)
• 代理人: 湯東鳳

1.一種珍珠貝小分子肽在皮膚創傷修復中的應用，其特征在于，所述珍珠貝小分子肽具有修復皮膚創傷的新用途；

所述珍珠貝小分子肽的制備方法包括以下步驟：

S1.珍珠貝酶解物的制備；

通過預處理分離出珍珠貝外套膜；所述珍珠貝外套膜酶解選用的蛋白酶包括：中性蛋白酶、動物蛋白酶、風味蛋白酶、堿性蛋白酶、菠蘿蛋白酶中的任一種，蛋白酶的添加量為3000-5000U/g，pH值6.5-10，酶解溫度45-55℃，酶解時間3-5小時，100℃滅酶10分鐘后，離心取上清液；

S2.將步驟S1所得到的上清液，選用孔徑為0.05-0.5um陶瓷膜，充分過濾后，采用不同截留分子量的超濾膜進行分離，收集分子量不同的肽段，包括分子量小于3000Da活性肽、分子量3000Da-5000Da活性肽、分子量5000Da-10000Da活性肽中的任一種，冷凍干燥即得珍珠貝小分子肽。

2.根據權利要求1所述的珍珠貝小分子肽在創傷修復中的應用，其特征在于，所述珍珠貝包括馬氏珠母貝、企鵝珍珠貝、三角帆蚌、池蝶蚌、褶紋冠蚌中的任一種。

3.根據權利要求1所述的珍珠貝小分子肽在創傷修復中的應用，其特征在于，所述珍珠貝小分子肽為分子量小于3000Da活性肽。

4.根據權利要求1所述的珍珠貝小分子肽在創傷修復中的應用，其特征在于，包括以下步驟：

（1）建立小鼠全層皮損創傷模型；

（2）對創傷模型的小鼠進行給藥；

（3）對創傷修復效果進行功效評價，所述功效評價包括一級功效評價和二級功效評價；所述一級功效評價包括止血活性評價、抗菌活性評價的的任一種或兩種；所述二級功效評價為皮膚創傷愈合評價，所述皮膚創傷愈合評價包括傷口愈合率測定、掉痂時間測定、表皮生長因子測定、炎癥因子測定、膠原蛋白生成分析中的任一種或幾種的組合。

5.根據權利要求4所述的珍珠貝小分子肽在創傷修復中的應用，其特征在于，所述步驟（2）中，給藥的方式為：取珍珠貝小分子肽5-50mg總氮含量/ml水涂抹傷口，涂滿為止，每天涂抹給藥一次，采用無菌生理鹽水為陰性對照組，連續給藥28天。

6.根據權利要求5所述的珍珠貝小分子肽在創傷修復中的應用，其特征在于，所述傷口愈合率測定和掉痂時間測定的方法為：所述步驟（2）中涂抹給藥后，從第0天開始，每2天在同一固定高度拍照記錄傷口創面情況，用軟件計算傷口愈合率、記錄掉痂時間；傷口愈合率測定的公式（2）為：

，公式中n是造模后天數。

7.根據權利要求5所述的珍珠貝小分子肽在創傷修復中的應用，其特征在于，所述步驟（3）中，所述表皮生長因子測定和炎癥因子測定中涉及的因子包括TNF-a、IL-1β、TGF-β1、COL1A1 mRNA、TGF-β1、a-SMA、TGF-BRII、Smad7中的任兩種或以上。

8.根據權利要求1所述的珍珠貝小分子肽在創傷修復中的應用，其特征在于，所述珍珠貝小分子肽可制成包括粉末狀、溶液狀、乳狀、膏狀、凝膠狀、復合纖維膜狀的任一種產品。

9.根據權利要求8所述的珍珠貝小分子肽在創傷修復中的應用，其特征在于，所述復合纖維膜狀產品為通過靜電紡絲技術制得的靜電紡絲復合纖維膜，所述的制備方法為：

a.將珍珠貝小分子肽溶于超純水中，使其完全溶解，以制得珍珠貝小分子肽溶液；

b.將載體材料溶于溶劑中，以制得載體材料溶液；所述載體材料包括基料和輔料，所述基料與輔料的質量比為1:1-4:1；所述基料為聚乙烯醇或聚己內酯，所述輔料為海參膠原蛋白或殼聚糖；所述溶劑為六氟異丙醇、三氟乙酸、三氟乙醇中的任一種；所述載體材料溶液的濃度為5％-10％；

c.將步驟a和步驟b所得的溶液充分渦旋混合，使其充分溶解，制得紡絲溶液；紡絲溶液中珍珠貝小分子肽的濃度為0.05-0.25％；

d.使用步驟c所獲得紡絲溶液，采用靜電紡絲的方法，制備獲得生物活性敷料；靜電紡絲所用溶劑為六氟異丙醇、三氟乙酸、三氟乙醇中的任一種。

10.根據權利要求9所述的珍珠貝小分子肽在創傷修復中的應用，其特征在于，步驟d中靜電紡絲電壓為15-30kV，注射器針頭與接收板之間的距離可為10-15cm，注射泵的推進速度可為0.01-0.50mL/min，紡絲環境溫度可為35-39℃。