[發(fā)明專利]一種大豆疫霉抑制劑及其制備方法

有效

• 申請?zhí)枺?/td>: 201910806605.2
• 申請日: 2019-08-29
• 公開（公告）號: CN110622968B
• 公開（公告）日: 2021-03-19
• 發(fā)明（設(shè)計(jì)）人: 劉冬;潘月敏;周多奇;吳彥;呂新霞
• 申請（專利權(quán)）人: 劉冬
• 主分類號: A01N37/40
• 分類號: A01N37/40;C07C67/48;C07C69/84;C12P7/62;A01P3/00
• 代理公司: 合肥律通專利代理事務(wù)所(普通合伙) 34140
• 代理人: 鄭松林

1.一種大豆疫霉抑制劑，其特征在于：包括沒食子酸丙酯和癸醇，癸醇作為沒食子酸丙酯的助溶劑，其用量比例為：0.1mg-0.3mg的癸醇：1-2mmol的沒食子酸丙酯。

2.根據(jù)權(quán)利要求1所述的一種大豆疫霉抑制劑，其特征在于：所述沒食子酸丙酯采用超臨界二氧化碳萃取方法，包括如下步驟：

(1)精確稱取顆粒大小在2-5mm大小的赤芍粉1.3-1.8kg，將其加入17-22％的溫度為6-8℃的純水中，在5℃條件下放置50-70分鐘，超臨界二氧化碳萃取中，超臨界二氧化碳提取壓力為33-37MPa，提取時(shí)間為54-57分鐘，二氧化碳流率為4.5-5.7L/min，即可提取出沒食子酸丙酯粗提物；

(2)沒食子酸丙酯純化：將(3)中沒食子酸丙酯粗提物按照1:5的質(zhì)量比溶于85-90℃的熱水中，用截留分子量10kDa的超濾膜超濾去大分子雜質(zhì)；然后用旋轉(zhuǎn)蒸發(fā)儀中濃縮至沒食子酸丙酯含量大于20-50mg/L；

(3)結(jié)晶純化與干燥：將(4)中的沒食子酸丙酯轉(zhuǎn)移到50ml的離心管中，4-6℃下放置12小時(shí)后有沉淀出現(xiàn)在離心管底部，在10000rpm/min下離心5分鐘，去上清，液氮速凍沉淀后，在-60℃、真空度為45的真空條件下冷凍干燥，待干燥至粉末，即獲得沒食子酸丙酯。

3.根據(jù)權(quán)利要求1所述的一種大豆疫霉抑制劑，其特征在于：所述沒食子酸丙酯還可由沒食子酸和丙醇在單寧酶的催化下制備，包括如下制備步驟：

(1)沒食子酸提取工藝：采用超臨界二氧化碳萃取方法，稱取顆粒大小在2-5mm大小的藍(lán)莓葉子或綠茶葉粉1.3-1.8kg，將其加入17-22％的溫度為2-8℃的純水中，在5℃條件下放置50-70分鐘，超臨界二氧化碳萃取中，超臨界二氧化碳提取壓力為23-27MPa，提取時(shí)間為32-50分鐘，即可提取出沒食子酸；

(2)單寧酶制備工藝：黑曲霉在液體土豆培養(yǎng)基中培養(yǎng)3-5天，過濾收集發(fā)酵液，用硫酸銨沉淀法沉淀，復(fù)溶提取粗蛋白，用截留分子量10kDa的超濾膜超濾去硫酸銨并濃縮蛋白，即得到單寧酶；

(3)沒食子酸丙酯合成方法：將8.9mmol沒食子酸溶于8.2％-13.6％丙醇溶液中，加入0.3-0.6mol的單寧酶在二氧化碳培養(yǎng)箱中，在20℃恒溫條件下催化反應(yīng)10-15小時(shí)，在-60℃、真空度為45的真空條件下冷凍干燥，待干燥至粉末，即獲得沒食子酸丙酯。

4.一種大豆疫霉抑制劑，其特征在于：大豆疫霉抑制劑的制備方法為沒食子酸丙酯與癸醇混合：將0.1mg-0.3mg的癸醇，1-2mmol的沒食子酸丙酯混合，完全溶解后依次添加60-70℃的熱水和20-25℃常溫水各500mL，即可以得到大豆疫霉抑制劑。