[發明專利]用于檢測人SLCO1B1和ApoE基因分型的引物探針組合物、試劑盒及檢測方法在審

申請號：	201910805489.2	申請日：	2019-08-29
公開（公告）號：	CN110387407A	公開（公告）日：	2019-10-29
發明（設計）人：	盛青松;姚魯帥	申請（專利權）人：	無錫市申瑞生物制品有限公司
主分類號：	C12Q1/6858	分類號：	C12Q1/6858;C12N15/11
代理公司：	蘇州友佳知識產權代理事務所(普通合伙) 32351	代理人：	儲振
地址：	214000 江蘇省無錫市惠山區惠山大道1***	國省代碼：	江蘇;32
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摘要：
搜索關鍵詞：	引物探針組合物試劑盒檢測分型基因分型多態性檢測特異性探針特異性引物高靈敏度基因檢測技術優勢實驗周期低成本高通量人血液內參
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【權利要求書】：

1.用于檢測人ApoE和SLCO1B1基因分型的引物探針組合物，其特征在于，包括：用于檢測待檢樣品中ApoE和SLCO1B1基因分型的特異性引物和特異性探針，內參試劑；

所述特異性引物包括：(a)用于檢測SLCO1B1*1b且核苷酸序列為SEQ ID NO.1和SEQ IDNO.2的引物，(b)用于檢測SLCO1B1*5且核苷酸序列為SEQ ID NO.8和SEQ ID NO.9的引物，(c)用于檢測ApoE-E4且核苷酸序列為SEQ ID NO.12和SEQ ID NO.13的引物，(d)用于檢測ApoE-E2且核苷酸序列為SEQ ID NO.16和SEQ ID NO.17的引物；

所述特異性探針包括：(e)用于檢測SLCO1B1*1b且核苷酸序列為SEQ ID NO.3和SEQ IDNO.4的探針，(f)用于檢測SLCO1B1*5且核苷酸序列為SEQ ID NO.10和SEQ ID NO.11的探針，(g)用于檢測ApoE-E4且核苷酸序列為SEQ ID NO.14和SEQ ID NO.15的探針，(h)用于檢測ApoE-E2且核苷酸序列為SEQ ID NO.18和SEQ ID NO.19的探針。

2.根據權利要求1所述的引物探針組合物，其特征在于，所述內參試劑由內參引物及內參探針組成；

內參引物的核苷酸序列為SEQ ID NO.5和SEQ ID NO.6，所述內參探針的核苷酸序列為SEQ ID NO.7，所述內參探針的5’端標記熒光報告基團CY5；

所述SEQ ID NO.3和SEQ ID NO.4的探針的5’端標記熒光報告基團，3’端標記熒光淬滅基團；所述熒光報告基團為FAM或者VIC，所述熒光淬滅基團為MGB或者BHQ。

3.用于檢測人ApoE和SLCO1B1基因分型的試劑盒，其特征在于，包括：第一擴增預混液，第二擴增預混液，用于檢測SLCO1B1的基因分型SLCO1B1*1b的第一PCR檢測試劑，用于檢測SLCO1B1基因分型SLCO1B1*5的第二PCR檢測試劑，用于檢測ApoE的基因分型ApoE-E4的第三PCR檢測試劑，用于檢測ApoE的基因分型ApoE-E2的第四PCR檢測試劑，Taq酶，陰性質控樣品及陽性質控樣品；

所述第一PCR檢測試劑含有核苷酸序列為SEQ ID NO.1和SEQ ID NO.2的引物、SEQ IDNO.3和SEQ ID NO.4的探針及內參試劑；

所述第二PCR檢測試劑含有核苷酸序列為SEQ ID NO.8和SEQ ID NO.9的引物、SEQ IDNO.10和SEQ ID NO.11的探針及內參試劑；

所述第三PCR檢測試劑含有核苷酸序列為SEQ ID NO.12和SEQ ID NO.13的引物、SEQID NO.14和SEQ ID NO.15的探針及內參試劑；

所述第四PCR檢測試劑含有核苷酸序列為SEQ ID NO.16和SEQ ID NO.17的引物、SEQID NO.18和SEQ ID NO.19的探針及內參試劑。

4.根據權利要求3所述的試劑盒，其特征在于，

所述第一擴增預混液由PCR緩沖液、dNTPs及MgCl₂組成，

所述第二擴增預混液由PCR保護劑及dNTPs組成，

所述陰性質控樣品為TE緩沖液，所述陽性質控品為雜合質粒；

所述雜合質粒由SLCO1B1*1b質粒、SLCO1B1*5質粒、ApoE-E4質粒及ApoE-E2質粒組成；

所述SLCO1B1*1b質粒具SEQ ID NO.20所示核苷酸序列；

所述SLCO1B1*5質粒具SEQ ID NO.21所示核苷酸序列；

所述ApoE-E4質粒具SEQ ID NO.22所示核苷酸序列；