[發明專利]一種偽狂犬病病毒GE基因主要抗原表位區域重組蛋白制備及ELISA檢測試劑盒

無效

• 申請號: 201910804785.0
• 申請日: 2019-08-28
• 公開（公告）號: CN110514830A
• 公開（公告）日: 2019-11-29
• 發明（設計）人: 朱傳剛;周志平;冒麗;劉冀;江嘉欣;紀榮毅;沈元曦
• 申請（專利權）人: 中國農業科學院上海獸醫研究所(中國動物衛生與流行病學中心上海分中心);尼沃諾斯(蘇州)生物工程有限公司
• 主分類號: G01N33/569
• 分類號: G01N33/569;G01N33/68;G01N33/535;G01N33/58;G01N33/541
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本發明提供一種偽狂犬病病毒GE基因主要抗原表位區域重組蛋白制備及ELISA檢測試劑盒，所述蛋白為GE蛋白的核心表位，構建的gE表位原核表達的重組質粒轉入Bl21后獲得了高效表達，同時由于重組蛋白連接有6個His的標簽，可以通過鎳柱進行親和層析，重組蛋白大小適中，又是疫苗缺失部分，因此通過間接ELISA或膠體金免疫層析試紙條法即可直接檢測豬體內是否存在相關抗體，即獲得豬場偽狂犬病的篩查。檢測時所需的標本量極小，不需要特殊儀器，肉眼直接判讀結果，且檢測簡便快速，特異性強，靈敏度高，準確可靠，成本低，應用廣泛。

技術領域

本發明涉及動物病毒學與免疫學檢測技術領域，更具體涉及一種用于檢測豬血清中偽狂犬病抗體的病毒gE蛋白的構建，同時還涉及一種利用上述蛋白制備免疫膠體金試紙的方法，還涉及一種用于檢測豬血清中偽狂犬病的病毒gE蛋白的免疫膠體金試紙的用途。

背景技術

偽狂犬病病毒（Pseudorabies Virus,PRV）是引起牛、羊、豬、犬和貓等多種家畜和野生動物發熱、奇癢（除豬外）和急性腦脊髓炎等為主要癥狀的皰疹病毒，由該病毒引起的疾病癥狀似狂犬病，故稱偽狂犬病。豬是PRV的貯存宿主和傳染源，健康豬與患豬、帶毒豬直接接觸可感染該病。主要引起母豬繁殖障礙、流產、產木乃伊胎、死胎和產弱仔，初生仔豬表現為腹瀉及神經癥狀，感染率和死亡率高達100%，給養豬業造成了嚴重的經濟損失[1]。病毒可以通過體液、精液、乳汁、糞便等排泄物傳播，也可以通過空氣傳播，通常可引起豬場的季節性爆發(Lisa E. Pomeranz et al., 2005)。

該病沒有明顯的季節性，一年四季均可發生，但以冬春兩季多發，病毒首先在豬呼吸道和鼻腔粘膜進行復制(Mask, M. et al., 1965），而后進入神經系統，從而引發呼吸系統與神經系統癥狀。研究表明，PRV基因組為大小約為150kb的雙股線狀DNA，可以編碼70~100種病毒蛋白，GE 為偽狂犬病病毒（PRV）非必需基因，GE主要抗原結構域位于GE基因第52~238氨基酸殘基之間，GE基因的缺失可以使PRV的毒力大大降低，同時GE糖蛋白還能影響PRV在豬體內的組織趨向性，從而有助于PRV向神經系統擴散。2011年以來，許多使用基因缺失活疫苗的規模化豬場出現了PR流行，主要表現為豬群GE抗體陽性率顯著升高。因此，GE糖蛋白可作為PRV主要診斷抗原。由于一般疫苗均是 g E 基因缺失株，疫苗免疫的豬不會產生針對 g E 蛋白的抗體故通過檢測 g E 抗體可以區分豬場內是否感染了或感染過 PRV 病毒。另外，g E 蛋白能促進病毒跨神經元傳播并進入中樞神經系統并擴散，相比而言g E基因缺失苗更加安全。目前，聯合使用 g E 基因缺失疫苗株，并通過 g E 抗體檢測對感染和免疫的豬進行區別診斷是 PRV 清除計劃的有效措施。

在中國，豬偽狂犬病病毒gE基因缺失疫苗也正在廣泛應用，gE基因缺失疫苗免疫接種后，在被免疫的豬血清中不能檢測到針對gE 蛋白的抗體, 為利用血清進行 PRV 野生毒株感染豬和gE 基因缺失疫苗免疫接種豬進行鑒別診斷提供了條件，這也是豬偽狂犬病凈化和根除計劃的基礎。因此，在凈化和根除計劃中，監測和檢測豬血清中的偽狂犬病病毒gE蛋白抗體是非常重要的一個環節。對已經免疫接種過的豬進行血清抗體檢測，如果檢測到gE蛋白抗體，說明豬已經感染了豬偽狂犬病病毒的野生毒株，可將感染的豬只淘汰，徹底凈化和根除豬偽狂犬病。

目前國內檢測豬偽狂犬病病毒gE蛋白抗體一般采用酶聯免疫吸附試驗（ELISA），但是由于這種檢測方法的特殊性，必須在實驗室中完成，所用時間長，費用高。因此建立一種快速、方便、特異性高、靈敏度強、現場可用的檢測方法很有優勢。

發明內容

本發明主要解決的技術問題是提供一種快速、高靈敏的免疫檢測產品及方法，實現高效、高密度的免疫檢測。