[發(fā)明專利]一種偽狂犬病病毒GE基因主要抗原表位區(qū)域重組蛋白制備及ELISA檢測試劑盒無效
| 申請?zhí)枺?/td> | 201910804785.0 | 申請日： | 2019-08-28 |
| 公開（公告）號： | CN110514830A | 公開（公告）日： | 2019-11-29 |
| 發(fā)明（設(shè)計）人： | 朱傳剛;周志平;冒麗;劉冀;江嘉欣;紀(jì)榮毅;沈元曦 | 申請（專利權(quán)）人： | 中國農(nóng)業(yè)科學(xué)院上海獸醫(yī)研究所(中國動物衛(wèi)生與流行病學(xué)中心上海分中心);尼沃諾斯(蘇州)生物工程有限公司 |
| 主分類號： | G01N33/569 | 分類號： | G01N33/569;G01N33/68;G01N33/535;G01N33/58;G01N33/541 |
| 代理公司： | 暫無信息 | 代理人： | 暫無信息 |
| 地址： | 200241 *** | 國省代碼： | 上海;31 |
| 權(quán)利要求書： | 查看更多 | 說明書： | 查看更多 |
| 摘要： | |||
| 搜索關(guān)鍵詞： | 重組蛋白 膠體金免疫層析試紙條 蛋白 偽狂犬病病毒 間接ELISA 高效表達(dá) 抗原表位 判讀結(jié)果 親和層析 特異性強(qiáng) 偽狂犬病 原核表達(dá) 直接檢測 重組質(zhì)粒 標(biāo)本量 核心表 靈敏度 檢測 表位 構(gòu)建 抗體 鎳柱 篩查 制備 疫苗 標(biāo)簽 體內(nèi) 轉(zhuǎn)入 應(yīng)用 | ||
1.一種包括偽狂犬病病毒GE基因主要抗原表位區(qū)域重組蛋白的ELISA試劑盒，所述試劑盒中包括：偽狂犬病病毒GE基因主要抗原表位區(qū)域重組蛋白、封閉液（5%脫脂奶粉），酶標(biāo)二抗（HRP標(biāo)記的兔抗羊Ig G），PBST，顯色液（TMB底物液）、終止液（2 mol/L硫酸）。
2.一種以偽狂犬病病毒GE基因主要抗原表位區(qū)域重組蛋白作為檢測抗原的間接ELISA方法，所述方法為：采用包被液將重組抗原稀釋至4.0μg/ml、2.0μg/ml、1.0μg/ml、0.5μg/ml和0.25μg/ml，100μl/孔包被于96孔板上，2～8℃包被過夜；PBST洗滌三次，加入用PBS（PH7.3）稀釋的5%的脫脂奶粉溶液封閉，300μl/孔，37℃封閉2小時；PBST洗滌三次，加入1:10—1:1000稀釋的豬偽狂犬病陽性血清和陰性血清，100μl/孔，37℃孵育1小時；PBST洗滌三次，分別加入1:2000倍PBST稀釋的HRP標(biāo)記的重組鏈球菌蛋白G，100μl/孔，37℃孵育30分鐘；PBST洗滌三次，加入TMB進(jìn)行顯色，100μl/孔，37℃反應(yīng)5分鐘左右；加入2mol/L H2SO4終止反應(yīng)，50μl/孔，讀取OD450，計算P/N值，以P/N值≥2.1的血清判為陽性，以P/N值<2.1的血清判為陰性。
3.如權(quán)利要求2所述的間接ELISA方法，其中，重組抗原最佳包被濃度為1.0μg/ml，最佳封閉液為PBS稀釋的5%的脫脂奶粉溶液，陽性血清和陰性血清最適合稀釋比為1:100。
4.如權(quán)利要求1所述的一種包括偽狂犬病病毒GE基因主要抗原表位區(qū)域重組蛋白的ELISA試劑盒，其中所述的所述重組蛋白GE的基因序列如SEQ ID NO.1所示。
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