[發明專利]生物樣本處理方法、生物樣本的亞鐵離子或總鐵離子測定方法及檢測試劑盒

有效

• 申請號: 201910801327.1
• 申請日: 2019-08-28
• 公開（公告）號: CN110455732B
• 公開（公告）日: 2021-09-28
• 發明（設計）人: 周昊函;徐巍;田佳怡;梁琳;李樂;梁婷
• 申請（專利權）人: 吉林大學
• 主分類號: G01N21/31
• 分類號: G01N21/31;G01N1/28;G01N1/38
• 代理公司: 深圳市科進知識產權代理事務所(普通合伙) 44316
• 代理人: 曹衛良

本申請提供一種生物樣本處理方法、生物樣本的亞鐵離子或總鐵離子測定方法及檢測試劑盒。上述生物樣本處理方法，酸性溶液通過低滲透原理既可以將細胞充分漲裂，同時也可以使細胞內的鐵離子在酸的作用下充分釋放，并且不與顯色劑發生其它反應，不影響對鐵離子的測量。上述生物樣本的亞鐵離子測定方法和生物樣本的總鐵離子測定方法，通過提高了還原劑的濃度，使鐵離子充分還原，通過增加了堿液，使得三吡啶基三嗪和溶液中的亞鐵離子生成穩定的藍紫色絡合物，可用于亞鐵離子的檢測，簡單易行且較為準確。上述亞鐵離子和總鐵離子檢測試劑盒，可用于生物樣本中亞鐵離子和總鐵離子的測定。

技術領域

本發明涉及生物樣本檢測技術領域，尤其涉及一種生物樣本處理方法、生物樣本的亞鐵離子測定方法、生物樣本的總鐵離子測定方法、生物樣本的亞鐵離子檢測試劑盒以及生物樣本的總鐵離子檢測試劑盒。

背景技術

生物體內有許多微量的金屬元素參與不同的生理代謝活動。鐵是一種礦物質，在DNA合成、電子轉移和氧運輸等許多生物過程中發揮著至關重要的作用。鐵是一種過渡元素，可形成一系列氧化態，最常見的是二價鐵(Fe²⁺或亞鐵)和三價鐵(Fe³⁺)。含鐵蛋白參與許多反應，通常利用鐵的氧化態的瞬時變化進行化學反應。鐵元素的缺少和過量都可能引起嚴重的人體機能障礙。因此，在臨床、藥物和環境等方面找到合適的鐵離子定量檢測方法一直都是科研工作者努力的方向。

目前，對于鐵元素定量分析主要集中在土壤，水質及大氣等，常用的方法有原子吸收法、電感耦合等離子體發射光譜法、熒光探針法及分光光度法。前兩者盡管測定精確，但是對設備要求較高，測定儀器較為昂貴，操作較為繁瑣，對于普通實驗室較難應用。熒光探針法尚處于研究探索階段，未普及應用。分光光度法對設備、試劑及操作要求相對簡單，且較為成熟，目前應用較為廣泛。常用的分光光度法包括2,4,6-三吡啶基三嗪顯色分光光度法、磺基水楊酸分光光度法、鄰菲羅啉分光光度法。

目前以上三種分光光度法針對測量對象主要是水樣，土壤等環境學樣本。存在樣品需要量大，實驗體系較大(至少是50mL樣本)，而生物學實驗樣本主要包括細胞、組織和血液樣本等，樣本量有限，且生物樣本pH值與環境樣本pH值范圍不同，應用于環境樣本實驗體系的pH值要求也不適用于生物生命科學實驗。此外，細胞及組織裂解液和上述方法的顯色劑發生反應干擾實驗結果。目前生物研究中針對生物樣本的鐵離子檢測試劑盒均為國外進口，價格昂貴，且試劑盒成分保密。若能發明出簡單可行的擁有我國自主知識產權的生物樣本鐵離子檢測試劑盒則填補了市場的空白，為我國的科研領域做出貢獻。

傳統的生物樣本的處理方法中，通常使得細胞內容物釋放的方法為裂解細胞，目前市場有通用的細胞裂解液與三吡啶基三嗪作用后生成乳白色沉淀，不能用于鐵離子的測定。利用滲透壓梯度，將生物樣本置于雙蒸水中，將細胞漲裂，但鐵離子大多與蛋白,DNA或RNA結合，很難釋放，經雙蒸水漲裂的細胞所釋放的內容物無法和三吡啶基三嗪反應生成絡合物。因此，如何將生物樣本妥善處理，使得樣本的鐵元素能夠準確檢測，以及如何能夠有效的測定生物樣本中的鐵元素都是需要攻克的問題。

發明內容

鑒于此，有必要提供一種能夠準確進行生物樣本的鐵元素檢測的一種生物樣本處理方法、生物樣本的亞鐵離子測定方法、生物樣本的總鐵離子測定方法、生物樣本的亞鐵離子檢測試劑盒以及生物樣本的總鐵離子檢測試劑盒。

一種生物樣本處理方法，包括以下步驟：

將生物樣品加入酸性溶液中，得到生物樣品溶液；

采用超聲震蕩或超聲破碎的方法對所述生物樣品溶液進行處理，得到混合液；

將所述混合液離心，棄去沉淀，留取上清液，得到處理后的生物樣品溶液。

在一個實施例中，所述將生物樣品加入酸性溶液中，得到生物樣品溶液的操作為：