[發(fā)明專利]生物樣本處理方法、生物樣本的亞鐵離子或總鐵離子測定方法及檢測試劑盒

有效

• 申請?zhí)枺?/td>: 201910801327.1
• 申請日: 2019-08-28
• 公開（公告）號: CN110455732B
• 公開（公告）日: 2021-09-28
• 發(fā)明（設(shè)計(jì)）人: 周昊函;徐巍;田佳怡;梁琳;李樂;梁婷
• 申請（專利權(quán)）人: 吉林大學(xué)
• 主分類號: G01N21/31
• 分類號: G01N21/31;G01N1/28;G01N1/38
• 代理公司: 深圳市科進(jìn)知識(shí)產(chǎn)權(quán)代理事務(wù)所(普通合伙) 44316
• 代理人: 曹衛(wèi)良

1.一種生物樣本的亞鐵離子測定方法，其特征在于，包括如下步驟：

將卵巢癌Skov3細(xì)胞系，培養(yǎng)24小時(shí)后，得到5×106個(gè)細(xì)胞，將培養(yǎng)的細(xì)胞收集后離心后棄去上清，獲得細(xì)胞團(tuán)塊；

將收集的細(xì)胞團(tuán)塊放于液氮中冷凍過夜后研磨成碎末；

將所得生物樣本粉末置于9%HCL中，4℃過夜后超聲震蕩樣本20分鐘，震蕩條件為25℃，40kHz；

將震蕩后的混合液置于4℃高速離心機(jī)12000g，離心10分鐘，棄去沉淀，留取上清液，得到處理后的生物樣品溶液；

向所述生物樣品溶液中依次加入D液、A液和C液，得到第一樣本，其中，D液為飽和氫氧化鈉溶液，A液為緩沖液，C液為顯色劑溶液；

將所述第一樣本于37℃條件下反應(yīng)30分鐘，得到第二樣本；

將所述第二樣本于595nm波長下測量得到吸光度值；

配置亞鐵離子的標(biāo)準(zhǔn)溶液，并且制備標(biāo)準(zhǔn)曲線，得到標(biāo)準(zhǔn)曲線方程；

將所述第二樣本的吸光度值代入所述標(biāo)準(zhǔn)曲線方程中，計(jì)算出所述生物樣品溶液的亞鐵離子濃度；

其中，A液的制備方法為將20mg的醋酸鈉與800μL的醋酸，混合后用雙蒸水定容至50mL；

C液的制備方法為將200mg的2,4,6-三吡啶基三嗪，加入100μL鹽酸溶解，加雙蒸水定容至50mL。

2.一種生物樣本的總鐵離子測定方法，其特征在于，包括如下步驟：

將卵巢癌Skov3細(xì)胞系，培養(yǎng)24小時(shí)后，得到5×106個(gè)細(xì)胞，將培養(yǎng)的細(xì)胞收集后離心后棄去上清，獲得細(xì)胞團(tuán)塊；

將收集的細(xì)胞團(tuán)塊放于液氮中冷凍過夜后研磨成碎末；

將所得生物樣本粉末置于9%HCL中，4℃過夜后超聲震蕩樣本20分鐘，震蕩條件為25℃，40kHz；

將震蕩后的混合液置于4℃高速離心機(jī)12000g，離心10分鐘，棄去沉淀，留取上清液，得到處理后的生物樣品溶液；

向所述生物樣品溶液中加入B液靜置10分鐘，然后依次加入D液、A液和C液，得到第一樣本，其中，B液為還原劑溶液，D液為飽和堿性溶液，A液為緩沖液，C液為顯色劑溶液；

將所述第一樣本于37℃條件下反應(yīng)30分鐘，得到第二樣本；

將所述第二樣本于595nm波長下測量得到吸光度值；

配置亞鐵離子的標(biāo)準(zhǔn)溶液，并且制備標(biāo)準(zhǔn)曲線，得到標(biāo)準(zhǔn)曲線方程；

將所述第二樣本的吸光度值代入所述標(biāo)準(zhǔn)曲線方程中，計(jì)算出所述生物樣品溶液的總鐵離子濃度；

其中，A液的制備方法為：將20mg的醋酸鈉與800μL的醋酸，混合后用雙蒸水定容至50mL；

B液的制備方法為將0.264g的抗壞血酸溶于5mL雙蒸水中；

C液的制備方法為將200mg的2,4,6-三吡啶基三嗪，加入100μL鹽酸溶解，加雙蒸水定容至50mL；

D液為飽和氫氧化鈉溶液。