[發(fā)明專利]一種堿性磷酸酶活性的熒光檢測方法

有效

• 申請?zhí)枺?/td>: 201910795469.1
• 申請日: 2019-08-27
• 公開（公告）號: CN110501317B
• 公開（公告）日: 2020-11-17
• 發(fā)明（設(shè)計(jì)）人: 孫健;楊秀榮;劉國永;趙佳會;盧沙沙
• 申請（專利權(quán)）人: 中國科學(xué)院長春應(yīng)用化學(xué)研究所
• 主分類號: G01N21/64
• 分類號: G01N21/64;G01N1/38
• 代理公司: 長春眾邦菁華知識產(chǎn)權(quán)代理有限公司 22214
• 代理人: 周蕾

1.一種堿性磷酸酶活性的熒光檢測方法，其特征在于，包括以下步驟：

步驟一：將4-羥基苯基磷酸鈉水溶液分別與不同已知活性的堿性磷酸酶標(biāo)準(zhǔn)溶液在緩沖溶液中混合孵育，得到一系列混合溶液；

步驟二：在步驟一制備的一系列混合溶液中分別加入3-(2-氨基乙基氨基)丙基三甲氧基硅烷水溶液，進(jìn)一步混合孵育，進(jìn)行熒光光譜測試；

步驟三：利用堿性磷酸酶標(biāo)準(zhǔn)溶液活性和熒光光譜強(qiáng)度的線性關(guān)系，繪制標(biāo)準(zhǔn)曲線；

步驟四：將4-羥基苯基磷酸鈉水溶液與待測堿性磷酸酶溶液在緩沖溶液中混合孵育，得到待測堿性磷酸酶混合溶液；

步驟五：在步驟四制備的待測堿性磷酸酶混合溶液中加入3-(2-氨基乙基氨基)丙基三甲氧基硅烷水溶液，進(jìn)一步混合孵育，進(jìn)行熒光光譜測試，得到待測堿性磷酸酶的熒光光譜強(qiáng)度；

步驟六：利用步驟三的標(biāo)準(zhǔn)曲線及步驟五測得的熒光光譜強(qiáng)度，計(jì)算得到待測堿性磷酸酶的活性。

2.根據(jù)權(quán)利要求1所述的堿性磷酸酶活性的熒光檢測方法，其特征在于，堿性磷酸酶標(biāo)準(zhǔn)溶液的活性范圍為：0～50mU/mL。

3.根據(jù)權(quán)利要求1所述的堿性磷酸酶活性的熒光檢測方法，其特征在于，步驟一和四中4-羥基苯基磷酸鈉水溶液的濃度為0.1～1.5mM。

4.根據(jù)權(quán)利要求1所述的堿性磷酸酶活性的熒光檢測方法，其特征在于，步驟一和四中緩沖溶液是pH＝7.5～10.5的10～100mM Tris-HCl溶液，并含有MgCl₂濃度為20～500μM。

5.根據(jù)權(quán)利要求1所述的堿性磷酸酶活性的熒光檢測方法，其特征在于，步驟一和四中孵育溫度為20～37℃，時(shí)間為10～90min。

6.根據(jù)權(quán)利要求1所述的堿性磷酸酶活性的熒光檢測方法，其特征在于，步驟二和五中3-(2-氨基乙基氨基)丙基三甲氧基硅烷水溶液的濃度為質(zhì)量分?jǐn)?shù)1％～5％。

7.根據(jù)權(quán)利要求1所述的堿性磷酸酶活性的熒光檢測方法，其特征在于，步驟二和五中孵育溫度為20～37℃，時(shí)間為20～120min。