[發明專利]一種新型孢子鞭毛染色液以及染色觀察方法

有效

• 申請號: 201910794671.2
• 申請日: 2019-08-27
• 公開（公告）號: CN110628865B
• 公開（公告）日: 2022-12-02
• 發明（設計）人: 史娟;姜粉霞;馬新
• 申請（專利權）人: 寧夏大學
• 主分類號: C12Q1/02
• 分類號: C12Q1/02;C12M1/22;C12M1/12;C12M1/00;C12R1/645
• 代理公司: 北京科家知識產權代理事務所(普通合伙) 11427
• 代理人: 陳娟

1.一種孢子鞭毛染色觀察方法，其特征在于，包含如下步驟，

染色液的配置配制：稱取番紅0.1g溶入蒸餾水中，定溶至100ml，裝入棕色滴瓶中，貼上標簽備用；稱取0.1g固綠溶入95%乙醇中，定溶至100ml，待全部溶解后轉移入棕色滴瓶中，貼標簽備用；

霜霉病菌的預培養：采集葉片正面具有鮮黃色的多角形病斑，葉背具有灰白色至灰黑色或黑色的霜霉層，霜霉層即霜霉病菌的孢子囊梗或孢子囊，迅速將采集的葉片裝入保濕袋中，防止葉片失水，影響孢子囊；或者是下午待太陽落山前進行霜霉病葉片采集，迅速裝入保濕袋中，防止葉片失水；帶回實驗室，葉柄用浸透蒸餾水的棉花包裹嚴實，放入15cm底部鋪有飽和水分的濾紙的培養皿中進行保濕培養，放入20度培養箱中保持培養12h；

孢子懸浮液的制備：將預培養的霜霉病菌，用潔凈的毛筆刷輕輕刷取霉層即病菌的孢子囊，避開葉片表皮細胞置于凹玻片上的滅菌水中，反復2-3次，蓋上蓋玻片，放入9cm的培養皿中保濕0.5h，≤26℃的室溫環境；

染色：用滴管吸取番紅或者固綠染色液，滴在凹玻片一邊，適度傾斜，讓染液進入凹玻片的滅菌水中，待凹玻片中的懸浮液呈均勻的紅色和藍色，放入培養皿中，置于20度培養箱中染色0.5h；

脫色：將滅菌水沿蓋玻片一邊緩緩滴入，洗去多余的染色液，用吸水紙擦干蓋玻片周圍多余的染色液；

顯微鏡觀察：將擦干凈的載玻片置于光學顯微鏡下低倍鏡下觀察，找到目標后進行高倍鏡觀察；可清晰地觀察到孢子鞭毛；并進行拍照。

2.如權利要求1所述的一種孢子鞭毛染色觀察方法，其特征在于，放入15cm底部鋪有飽和水分的濾紙的培養皿中進行保濕培養是采用如下專用設計裝備完成的，該專用設計裝備是保濕培養結構，該保濕培養結構包含相互扣合的培養皿下方（1）和培養皿上方（2），培養皿上方（2）朝下熱合著一個立方體形狀的不銹鋼濾網（5），該不銹鋼濾網（5）中放置有海綿（9），在培養皿上方（2）上包含一個螺紋孔，還包含穿過該螺紋孔的手持軸（6）；手持軸（6）為螺紋軸，轉動手持軸就能夠讓手持軸下方的擠壓板（8）朝下運動擠壓海綿（9）；擠壓的過程中能夠讓海綿中的水朝下穿過不銹鋼濾網（5）滴到保濕培養結構（3）上；不打開培養皿下方（1）和培養皿上方（2）避免空氣中的雜菌進入就能加水；

所述的保濕培養結構（3）為一個包覆結構，該包覆結構中部包含夾持空間（4），包覆結構為持水材料；

霜霉病葉片能夠放置進夾持空間（4）中使得霜霉病葉片兩面都能接觸到持水材料。

3.如權利要求2所述的一種孢子鞭毛染色觀察方法，其特征在于，所述的持水材料為濾紙。