[發(fā)明專利]地中?；【倚允删wvB_VmeM-Yong及其應(yīng)用

在審

• 申請(qǐng)?zhí)枺?/td>: 201910792955.8
• 申請(qǐng)日: 2019-08-14
• 公開（公告）號(hào): CN112391358A
• 公開（公告）日: 2021-02-23
• 發(fā)明（設(shè)計(jì)）人: 許麗華;李登峰;方靜;楊銳;童貽剛;秦偉南;林威;孫智同;徐夢(mèng)雅
• 申請(qǐng)（專利權(quán)）人: 寧波大學(xué)
• 主分類號(hào): C12N7/00
• 分類號(hào): C12N7/00;C12N7/02;A61K35/76;A61P31/04;C12R1/92
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本發(fā)明公開了一種地中?；【咝Я倚允删wvB_VmeM?Yong及其應(yīng)用，涉及地中?；【廴竞透腥镜纳锾幚?。vB_VmeM?Yong是首株以致病性地中?；【鸀榘袠?biāo)分離獲得的噬菌體。vB_VmeM?yong保藏于微生物菌種保藏管理委員會(huì)普通微生物中心，保藏編號(hào)為CGMCC No.17098。vB_VmeM?Yong可專一性裂解致病性地中?；【?，潛伏期約為40min，裂解期為40min?150min。vB_VmeM?Yong的應(yīng)用，用于特異性地抑制、殺死高致病性地中海弧菌。其對(duì)紫菜有明顯的保護(hù)作用。

技術(shù)領(lǐng)域

本發(fā)明涉及一種病原菌的噬菌體，尤其是涉及一種地中?；【倚允删wvB_VmeM-Yong及其應(yīng)用。

背景技術(shù)

地中海弧菌(Vibrio mediterranei)屬于弧菌科，弧菌屬。弧菌屬是弧菌科的一個(gè)主要類群，其成員廣泛存在于海洋環(huán)境中，可分為致病性的或非致病性的。自1986年由Pujalte和Garay第一次描述地中?；【詠?，該細(xì)菌已從各種海洋生物中分離出來，如植物、貝類、其他海洋無脊椎動(dòng)物和來自不同地理區(qū)域的魚類。地中海弧菌117-T6株就是從爆發(fā)黃斑病的條斑紫菜Pyropia yezoensis絲狀體的典型患病樣本中分離鑒定得到的，其可以導(dǎo)致多種紫菜絲狀體呈現(xiàn)致死性黃斑病。在我國紫菜養(yǎng)殖有著多年的歷史，大規(guī)模的紫菜生產(chǎn)集團(tuán)也在形成，但是對(duì)紫菜病害的防治，特別是對(duì)紫菜危害最大的黃斑病沒有有效的防治措施。嚴(yán)重影響了養(yǎng)殖戶的經(jīng)濟(jì)收入和紫菜養(yǎng)殖業(yè)的健康持續(xù)發(fā)展。

噬菌體(phage)是感染細(xì)菌、真菌的病毒。裂解性噬菌體又可以稱為烈性噬菌體或者毒性噬菌體(virulent phage)。裂解性噬菌體進(jìn)入宿主菌體內(nèi)后，開始了自己的生命循環(huán)，進(jìn)行不斷地復(fù)制、增殖得到大量的子代噬菌體，宿主菌被裂解。烈性噬菌體在抗菌藥物研發(fā)方面具有巨大的潛力和優(yōu)勢(shì)。烈性噬菌體特異性侵染目標(biāo)細(xì)菌，將其裂解，并且不感染人和動(dòng)、植物，也不會(huì)對(duì)正常微生物群落和環(huán)境造成污染。噬菌體具有宿主依賴性，隨宿主的清除而消亡，不會(huì)殘留在動(dòng)物體內(nèi)。

研發(fā)能夠高效裂解地中海弧菌的噬菌體對(duì)養(yǎng)殖業(yè)的健康、持續(xù)發(fā)展具有重要的現(xiàn)實(shí)意義。

發(fā)明內(nèi)容

本發(fā)明所要解決的技術(shù)問題是提供一種可高效、快速地裂解地中海弧菌的噬菌體及其應(yīng)用。該噬菌體特異性感染、裂解地中?；【?。

本發(fā)明解決上述技術(shù)問題所采用的技術(shù)方案為：一種以地中?；【?17-T6株為靶標(biāo)分離獲得的特異侵染地中?；【牧呀庑允删w，依據(jù)噬菌體命名原則命名vB_VmeM-Yong(即Virus of bacteria，Vibrio mediterranei，Myoviridae的縮寫)，分類上屬于肌尾科Myoviridae。vB_VmeM-Yong于2019年1月22日保藏于微生物菌種保藏管理委員會(huì)普通微生物中心，保藏編號(hào)為CGMCC No.17098，保藏機(jī)構(gòu)地址為：北京市朝陽區(qū)北辰西路1號(hào)院3號(hào)中國科學(xué)院微生物研究所，郵編：100101。

該噬菌體的生物學(xué)特征如下：噬菌體vB_VmeM-Yong具有呈現(xiàn)二十面體近似球形的頭部，直徑109nm(±9nm)，具有可收縮的尾部，長度320nm(±50nm)；噬菌體vB_VmeM-Yong在地中?；【木桨迳峡梢孕纬赏该鞯氖删撸皇删wvB_VmeM-Yong可裂解地中海弧菌，使菌液澄清化；噬菌體vB_VmeM-Yong的宿主范圍具有種特異性；vB_VmeM-Yong潛伏期約為40min，裂解期為40min-150min。

上述噬菌體vB_VmeM-Yong的分離純化方法，具體包括如下步驟：

(1)地中?；【?17-T6的活化、培養(yǎng)