[發(fā)明專利]曼氏血吸蟲蟲卵可溶性抗原的制備及其ELISA檢測(cè)試劑盒

在審

• 申請(qǐng)?zhí)枺?/td>: 201910792330.1
• 申請(qǐng)日: 2019-08-26
• 公開（公告）號(hào): CN110531063A
• 公開（公告）日: 2019-12-03
• 發(fā)明（設(shè)計(jì)）人: 朱傳剛;沈元曦;紀(jì)榮毅;林矯矯;洪煬
• 申請(qǐng)（專利權(quán)）人: 中國(guó)農(nóng)業(yè)科學(xué)院上海獸醫(yī)研究所(中國(guó)動(dòng)物衛(wèi)生與流行病學(xué)中心上海分中心)
• 主分類號(hào): G01N33/535
• 分類號(hào): G01N33/535;G01N33/58;G01N33/543;G01N33/53;A01K67/033
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本發(fā)明涉及曼氏血吸蟲蟲卵可溶性抗原的制備及其ELISA檢測(cè)試劑盒。本發(fā)明的血吸蟲蟲卵粗抗原純化方法設(shè)計(jì)巧妙，操作簡(jiǎn)便，由此得到的純化抗原作為血吸蟲抗體檢測(cè)抗原，可以減少血清用量，增加檢測(cè)靈敏度，降低交叉反應(yīng)率，擴(kuò)大應(yīng)用范圍，檢測(cè)效果準(zhǔn)確可靠，操作簡(jiǎn)便易行，成本降低，更適用于血吸蟲病低度流行區(qū)現(xiàn)場(chǎng)流行病學(xué)調(diào)查、疾病篩查以及免疫學(xué)診斷，適于大規(guī)模推廣應(yīng)用。

技術(shù)領(lǐng)域

本發(fā)明屬于寄生蟲學(xué)診斷領(lǐng)域，尤其是涉及曼氏血吸蟲蟲卵的分離純化方法及蟲卵可溶性抗原的制備方法，進(jìn)一步的涉及一種ELISA檢測(cè)試劑盒。

背景技術(shù)

血吸蟲病是一種流行廣泛、危害嚴(yán)重的寄生蟲病。血吸蟲感染，其成蟲寄生在宿主腸系膜靜脈，在那里產(chǎn)生蟲卵，并隨血流到肝臟，引起肝臟的病變。眾所周知，一些病原體感染可導(dǎo)致腫瘤的發(fā)生和促進(jìn)腫瘤的發(fā)展，如幽門螺桿菌、人乳頭狀病毒、肝炎病毒等。血吸蟲在宿主體內(nèi)寄生于腸系膜靜脈和門靜脈，蟲卵主要沉積在肝臟和腸道。蟲卵釋放抗原物質(zhì)，引起宿主免疫系統(tǒng)發(fā)生超敏反應(yīng)，形成蟲卵周圍的炎癥細(xì)胞聚集，最終形成蟲卵肉芽腫，并可進(jìn)一步纖維化，形成蟲卵結(jié)節(jié)。寄生人體的血吸蟲有日本血吸蟲、曼氏血吸蟲、埃氏血吸蟲及湄公血吸蟲。其中曼氏血吸蟲廣泛流行于非洲（尼羅河三角洲，包括埃及、肯尼亞、坦桑尼亞等）、南美洲（巴西、加勒比海等國(guó)）、亞洲（阿拉伯半島）。在我國(guó)雖然有零星的曼氏血吸蟲病的病例報(bào)告，但由于缺乏中間宿主，尚未形成該病的傳播。雖然我國(guó)的曼氏血吸蟲病人多來自外出非洲的務(wù)工人員，是輸入性病例，但該病潛在的危害不容忽視。

發(fā)明內(nèi)容

本發(fā)明的目的就是為了克服上述現(xiàn)有技術(shù)存在的缺陷而提供一種適合曼氏血吸蟲蟲卵分離純化的方法，并以此為基礎(chǔ)，建立了曼氏血吸蟲的ELISA診斷方法；該方法可以用于曼氏血吸蟲病的診斷。

本發(fā)明的目的可以通過以下技術(shù)方案來實(shí)現(xiàn)：

在本發(fā)明的第一方面，提供一種曼氏血吸蟲的小鼠感染動(dòng)物模型，所述動(dòng)物模型的構(gòu)建方法包括：

(1)通過人工感染制備曼氏血吸蟲尾蚴，這種尾蚴具有適宜動(dòng)物宿主，如小鼠。

(2)用曼氏血吸蟲尾蚴通過皮膚感染進(jìn)入宿主體內(nèi)，并經(jīng)歷童蟲、成蟲發(fā)育，并產(chǎn)蟲卵；

(3)產(chǎn)出的蟲卵部分能隨血流分布在肝臟、腸壁等組織；

進(jìn)一步的，本發(fā)明提供一種曼氏血吸蟲蟲卵分離純化的方法，所述方法為：

(1)曼氏血吸蟲尾蚴感染適宜宿主，宿主包括但不限于BALB/c鼠；

(2)取感染6至10周的宿主動(dòng)物肝臟，用于蟲卵的制備

(3)分離及純化曼氏血吸蟲的蟲卵

進(jìn)一步的，本發(fā)明提供一種曼氏血吸蟲蟲卵可溶性抗原的制備方法；

進(jìn)一步的，本發(fā)明提供一種曼氏血吸蟲蟲卵純化抗原在制備檢測(cè)血吸蟲抗體的檢測(cè)產(chǎn)品中的應(yīng)用；

進(jìn)一步的，本發(fā)明提供一種適合曼氏血吸蟲的ELISA檢測(cè)試劑盒，包括曼氏血吸蟲蟲卵純化抗原作為檢測(cè)抗原。

附圖說明

圖1小鼠不同組織沉積蟲卵百分比（感染60d）。

圖2樣品血清以曼氏蟲卵可溶性抗原為診斷抗原進(jìn)行的間接ELISA敏感性，特異性，重復(fù)性檢測(cè)。

實(shí)施例

以下的實(shí)施例便于更好地理解本發(fā)明，但并不限定本發(fā)明。下述實(shí)施例中的實(shí)驗(yàn)方法，如無特殊說明，均為常規(guī)方法。下述實(shí)施例中所用的試驗(yàn)材料，如無特殊說明， 均為自常規(guī)生化試劑商店購(gòu)買得到的。

實(shí)施例1 曼氏血吸蟲的蟲卵分布檢測(cè)和蟲卵制備

1.1 曼氏血吸蟲的小鼠模型建立