[發明專利]一種生產子囊霉素的基因工程菌及其制備方法和用途

有效

• 申請號: 201910784365.0
• 申請日: 2019-08-23
• 公開（公告）號: CN112410274B
• 公開（公告）日: 2023-01-24
• 發明（設計）人: 陳少欣;余志拓;楊松柏;張正玉;趙苗苗
• 申請（專利權）人: 上海醫藥工業研究院;中國醫藥工業研究總院
• 主分類號: C12N1/21
• 分類號: C12N1/21;C12N9/00;C12N15/52;C12N9/02;C12N15/53;C12P17/18;C12R1/55
• 代理公司: 上海弼興律師事務所 31283
• 代理人: 薛琦;呂學辰

1.一種生產子囊霉素的基因工程菌，其特征在于，其為天然生產子囊霉素的吸水鏈霉菌(Streptomyces hygroscopicus)中過表達accA2、accB和accE基因的工程菌；所述accA2、accB和accE基因編碼的氨基酸序列的NCBI登錄號分別為NP_629074.1、NP_629669.1和NP_629670.1。

2.如權利要求1所述的基因工程菌，其特征在于，所述accA2、accB和accE基因的核苷酸序列的GeneID分別為1100362、1100975和1100976。

3.如權利要求1所述的基因工程菌，其特征在于，所述基因工程菌為在所述天然生產子囊霉素的吸水鏈霉菌的基因組中整合了accA2、accB和accE基因的工程菌，或所述基因工程菌為包含含有accA2、accB和accE基因的重組表達載體的工程菌。

4.如權利要求3所述的基因工程菌，其特征在于，所述整合的位點為attB位點。

5.如權利要求4所述的基因工程菌，其特征在于，所述整合的位點為ΦC31 attB位點。

6.如權利要求1所述的基因工程菌，其特征在于，所述accB位于accE上游，所述accA2位于所述accB上游；

和/或，所述天然生產子囊霉素的吸水鏈霉菌為吸水鏈霉菌ATCC 14891。

7.如權利要求1～6任一項所述的基因工程菌，其特征在于，其是在天然生產子囊霉素的吸水鏈霉菌中還過表達fkbS基因的工程菌；所述fkbS基因編碼的氨基酸序列如序列表中SEQ ID NO:4所示。

8.如權利要求7所述的基因工程菌，其特征在于，所述fkbS基因的核苷酸序列如序列表中SEQ ID NO:3所示。

9.如權利要求7所述的基因工程菌，其特征在于，所述基因工程菌在所述天然生產子囊霉素的吸水鏈霉菌的基因組中整合了fkbS基因。

10.一種制備如權利要求1～9任一項所述的基因工程菌的方法，其特征在于，所述方法包括下列步驟：

1)構建過表達accA2、accB和accE基因的重組表達載體；

2)將構建的重組表達載體轉化到中間宿主菌；

3)將帶有重組表達載體的所述中間宿主菌與天然生產子囊霉素的吸水鏈霉菌進行接合培養。

11.如權利要求10所述的方法，其特征在于，所述重組表達載體的骨架為質粒pSET-152；和/或，所述的中間宿主菌為大腸桿菌；和/或，所述天然生產子囊霉素的吸水鏈霉菌為吸水鏈霉菌ATCC 14891；和/或，所述的接合培養為在MS培養基培養，培養溫度為28℃；和/或，所述重組表達載體還包括fkbS基因。