[發(fā)明專利]一種鹽析萃取他克莫司發(fā)酵液的方法

有效

• 申請(qǐng)?zhí)枺?/td>: 201910763351.0
• 申請(qǐng)日: 2019-08-19
• 公開（公告）號(hào): CN112390817B
• 公開（公告）日: 2023-07-07
• 發(fā)明（設(shè)計(jì)）人: 王月;劉文財(cái);馬魯南
• 申請(qǐng)（專利權(quán)）人: 魯南制藥集團(tuán)股份有限公司
• 主分類號(hào): C07D498/18
• 分類號(hào): C07D498/18
• 代理公司: 暫無(wú)信息
• 代理人: 暫無(wú)信息

本發(fā)明屬于生物工程技術(shù)領(lǐng)域，具體設(shè)計(jì)一種鹽析萃取他克莫司發(fā)酵液的方法。本發(fā)明采用向含有他克莫司的發(fā)酵液中加入氯化鋁和鹽析劑及親水性有機(jī)溶劑充分?jǐn)嚢瑁偌尤胧杷杂袡C(jī)溶劑充分?jǐn)嚢瑁o置，形成三液相萃取體系，分離富含他克莫司的下相即可。本發(fā)明工藝簡(jiǎn)單，操作周期短，分離效率高、生產(chǎn)成本低，是一種具有工業(yè)應(yīng)用前景的他克莫司純化方法。

技術(shù)領(lǐng)域

本發(fā)明屬于生物工程技術(shù)領(lǐng)域，具體涉及一種鹽析萃取他克莫司發(fā)酵液的方法。

背景技術(shù)

他克莫司(tacrolimus)又名FK-506，是由日本藤澤制藥公司于1982年從筑波鏈霉菌代謝產(chǎn)物中提取的一種大環(huán)內(nèi)酯類化合物，其分子式為C₄₄H₆₉NO₁₂，分子量為804.02，結(jié)構(gòu)式如下所示。

他克莫司

他克莫司對(duì)T細(xì)胞具有選擇性的抑制作用，主要是通過(guò)抑制TH細(xì)胞釋放IL-2、IL-3、IFN-γ，以及抑制IL-2R的表達(dá)而發(fā)揮其強(qiáng)大的免疫抑制作用。適用于防治器官移植后的排斥反應(yīng)，其臨床療效是環(huán)孢素的100倍。

目前，他克莫司主要通過(guò)發(fā)酵法進(jìn)行制備，因此在發(fā)酵過(guò)程中會(huì)產(chǎn)生諸多異構(gòu)體或者類似物，他克莫司不僅分布于菌絲體中，在發(fā)酵液中也有分布，這就增加了他克莫司分離純化的難度。

從發(fā)酵液中提取他克莫司的方法有多種，CN101481715A公開了一種采用生物發(fā)酵提純他克莫司的方法，首先采用菌絲體抽提、發(fā)酵液萃取、大孔樹脂吸附、硅膠層析及冷卻結(jié)晶技術(shù)得到他克莫司純品，純度達(dá)到98％。

CN105367586A公開了一種發(fā)酵液中提取他克莫司的方法，使用陶瓷膜、納濾膜等設(shè)備，采用有機(jī)溶劑將發(fā)酵液中的他克莫司萃取出來(lái)。

CN106046023A公開了一種他克莫司的浸提方法，先用板框過(guò)濾收集菌體，閃蒸干燥再把菌體采用流化床浸提，流化床浸提收率高達(dá)94％。

CN101712686A公開了一種發(fā)酵液中他克莫司的分離純化方法，將鏈霉菌發(fā)酵液用板框壓濾得到菌體，用有機(jī)溶劑多次室溫浸提菌體，得到浸提液，將浸提液濃縮后進(jìn)行大孔樹脂和硅膠柱層析，柱層析所得他克莫司用混合溶劑進(jìn)行濃縮和結(jié)晶，他克莫司純度達(dá)到96.5％。

CN106478664A公開了一種發(fā)酵液中提取純化他克莫司的方法，具體步驟包括：發(fā)酵液的固液分離，收集濾渣；丙酮浸提，得到浸提液；浸提液濃縮及大孔樹脂處理，收集解吸液；硅膠柱層析，收集層析液；層析液處理，減壓濃縮得到第三濃縮液，加入乙酸乙酯萃取，加入正己烷，冷卻至1～10℃析晶，收集晶體，真空干燥得他克莫司。他克莫司純度達(dá)到98.5％以上，子囊霉素和二氫他克莫司的含量低于0.2％。

可以看出以上方法，均是將他克莫司發(fā)酵液進(jìn)行固液分離，再將菌絲體加入有機(jī)溶劑萃取，這種預(yù)處理方式只是浸提了菌絲體中的他克莫司，忽略了發(fā)酵液中含有的他克莫司。并且先將發(fā)酵液利用板框或離心固液分離，操作繁瑣，提取時(shí)間長(zhǎng)，浸提所用有機(jī)溶劑量比較大，不利于環(huán)保。

CN107556327A公開了一種分離純化他克莫司的方法，是對(duì)發(fā)酵法制備他克莫司所形成的含有他克莫司的發(fā)酵液中直接進(jìn)行純化操作，采用兩套中壓層析色譜設(shè)備，使用低色譜純度他克莫司發(fā)酵提取液作為原料，經(jīng)過(guò)第一道層析色譜柱去除多糖、蛋白質(zhì)等雜質(zhì)；隨后用旋轉(zhuǎn)蒸發(fā)工藝除去提取用溶劑，再次溶解并進(jìn)行第二道層析色譜柱分理處低濃度并含他克莫司的洗脫液，洗脫液使用納濾膜濃縮后得到高純度并呈固態(tài)的他克莫司。