[發明專利]一種白葡萄球菌粉的制備工藝

在審

• 申請號: 201910761640.7
• 申請日: 2019-08-19
• 公開（公告）號: CN110468068A
• 公開（公告）日: 2019-11-19
• 發明（設計）人: 林凡友;聶昌盛;孫永喜;王世禮;毛傳偉;周龍霞
• 申請（專利權）人: 仁和堂藥業有限公司
• 主分類號: C12N1/20
• 分類號: C12N1/20;C12R1/44
• 代理公司: 暫無信息
• 代理人: 暫無信息

1.一種白葡萄球菌粉的制備工藝，其特征是包括如下步驟：

步驟1）菌種的制備：

按無菌要求，把凍干管內的菌種傳至若干試管斜面，在37±1℃培養18-24小時，冷藏保存；把試管斜面的菌種傳若干扁瓶斜面，在37±1℃培養8-10小時，用營養肉湯培養基或生理鹽水制成均勻的菌懸液供生產使用，在傳扁瓶斜面的同時可傳若干試管斜面，培養后保存，并填好菌種傳代記錄；

步驟2）培養基配制：

將玉米漿消化液打入種子罐內，加入各物料，用水補至全量，攪拌充分溶解后，用氫氧化鈉溶液調PH值至7.4-7.6后，滅菌；

將玉米漿消化液打入配料罐內，加入各物料，用水補至規定體積，攪拌充分溶解后，用氫氧化鈉調PH值至7.4-7.6后，用打料泵將配制后的培養基打入發酵罐內，滅菌；

步驟3）培養：

（1）下種、移種：

種子罐內溫度降至37℃時，將準備好的種子以無菌手續接入種子罐內培養，待菌體生長進入對數生長期，并達到一定濃度（一般200億/ml）時，取種并移入發酵罐內繼續培養（移種管道在移種前30-40分鐘滅菌好備用）；

（2）培養：

培養過程中，隨時觀察溫度、通氣量和罐內泡沫，培養時通氣量應保持在0.05-0.08MPa，溫度應保持在36-38℃之間，PH值每次調整后為7.2-7.4之間；在菌體的對數生長期時，通氣量要相應增大；

（3）取樣：

下種、移種前以無菌手續（將取樣口通蒸汽滅菌15-20分鐘）取樣，檢測培養基的PH值、濃度、吸收度值、鏡檢，以及做無菌檢驗；斜面下種4小時，開始取樣檢測，大瓶菌種下種2小時開始取樣檢測，發酵罐移種后2小時開始取樣檢測，檢測PH值、濃度、菌型，每次取樣操作人員與化驗人員一起操作，由化驗員檢測各項目，將化驗結果及時通知操作人員；操作人員在菌體大量生長繁殖時要每半小時檢測并調整PH值；

（4）補料：

培養過程中，如泡沫過多可酌情加入消泡劑。

2.根據檢測的PH值濃度，補加滅菌后氫氧化鈉溶液，使調整后的PH值在7.2-7.4之間，同時補加適量的葡萄糖溶液；

步驟4）滅活：

菌體大量生長繁殖后，若2-3小時內濃度不再明顯上升，PH值和吸收度值基本不變的情況下，經檢測合格，按0.6%的比例加入甲醛溶液，攪拌5-10分鐘，靜置2小時，徹底滅活后，沉淀分離；

步驟5）沉淀、干燥：

將滅活后的發酵液壓入沉淀罐，用硫酸調PH值6.0-6.5之間，按1.5-2.5%的比例加入絮凝劑，充分攪拌混合后靜置30分鐘，分離，將菌泥均勻放置烘盤內，厚度不超過5cm，85-95℃干燥3小時，使干燥失重≤6.0%；

步驟6）粉碎：將干燥后的菌塊，先通過10目篩粗粉碎成小顆粒，再細粉碎，細粉碎后的菌粉應通過100目篩；

步驟7）混合：將菌粉置混合機中，運轉10分鐘，將菌粉放入料桶內，最后混合均質的菌粉為一批；

步驟8）包裝：將檢驗合格的菌粉按20kg/桶包裝，內為雙層塑料袋，外為紙桶，桶內放裝箱單，桶外貼標簽，桶內外品名、批號、數量應一致，要認真核對，檢驗合格后入庫。