[發明專利]一種室內快速篩選防治玉米瘤黑粉病藥劑的方法

在審

• 申請號: 201910753742.4
• 申請日: 2019-08-15
• 公開（公告）號: CN110501295A
• 公開（公告）日: 2019-11-26
• 發明（設計）人: 楊云鶴;石潔;張海劍;郭寧;劉樹森;金戈
• 申請（專利權）人: 河北省農林科學院植物保護研究所
• 主分類號: G01N21/31
• 分類號: G01N21/31;C12N1/14;C12Q1/18;C12Q1/04;C12R1/645
• 代理公司: 11624 北京卓嵐智財知識產權代理事務所(特殊普通合伙)
• 代理人: 王新月<國際申請>=<國際公布>=<進入

本發明提供了一種室內快速篩選玉米瘤黑粉病防治藥劑的方法，屬于玉米病害防治技術領域，所述方法包括以下步驟：配制一系列含有不同有效成分濃度待測藥劑的馬鈴薯葡萄糖液體培養基，將活化的玉蜀黍黑粉菌菌株移入上述含藥培養基中，用酶標儀測量菌液在590nm處的初始吸光值OD₁和培養16?20h后的最終吸光值OD₂；計算各處理菌液OD的增長值ΔOD，計算抑制率；以殺菌劑有效成分濃度的對數值為自變量，抑制率幾率值為因變量，計算毒力回歸方程，并求出抑制中濃度EC₅₀。本發明的方法耗時短、操作簡便、數據可靠、重復性強，非常適用于對玉米瘤黑粉病殺菌劑的篩選，具有很強的實用性。

技術領域

本發明涉及玉米病害防治技術領域，具體涉及一種室內快速篩選防治玉米瘤黑粉病藥劑的方法。

背景技術

玉米瘤黑粉病(或稱玉米黑粉病)是由玉蜀黍黑粉菌(Ustilago maydis)，或稱為玉米黑粉菌、玉米瘤黑粉菌等引起的玉米病害，主要發生于溫暖干燥地區，且春播區比夏播區發病嚴重，一般發病率為5～10％，嚴重的可造成30～80％的產量損失，是我國黃淮海區、東北區和西北區玉米生產上的主要病害，也是該區玉米新品種審定時進行抗性評價的病害。

由于市場上缺乏針對玉米瘤黑粉病的專一性殺菌劑，目前對于該病害的防治主要以預防為主。但是對于玉米瘤黑粉病的防治，開發及篩選適宜的防治藥劑仍然是十分有效且必不可少的一種手段。隨著環境監管力度及農藥市場競爭壓力的增大，市場對于有效防治玉米瘤黑粉病的新型農藥的需求也越來越迫切。由于玉米瘤黑粉病的致病菌玉蜀黍黑粉菌為酵母狀真菌，在平板培養基上菌落并不呈規律的放射狀生長，且生長緩慢，使用傳統的含藥培養基十字交叉測量法對其進行毒力測定不僅測定時間長，測量的準確性也難以保證。其他研究中采用的玻片萌發法，不僅操作繁瑣且觀察的孢子樣本小，藥劑評價結果說服力有限。因此，研究開發一套針對該病害的準確可靠的室內藥劑快速篩選方法，有利于提高針對該病害的田間藥劑篩選效率，提高新型農藥的成功篩選率，對于該病害的防治具有重要的實際研究價值。

發明內容

本發明的目的在于提供一種室內快速篩選玉米瘤黑粉病防治藥劑的方法，該方法具有方便快速、結果準確可靠的特點，可以有效地為田間藥劑篩選提供參考。

為了實現上述發明目的，本發明提供以下技術方案：

本發明提供了一種室內快速篩選玉米瘤黑粉病防治藥劑的方法，包括以下步驟：

1)配制一系列含有不同有效成分濃度待測藥劑的馬鈴薯葡萄糖液體培養基，將活化的玉蜀黍黑粉菌菌株移入上述含藥培養基中，使得含藥培養基中孢子的濃度為1×10⁵-1×10⁶個/ml，用酶標儀測量菌液在590nm處的初始吸光值OD₁；

2)將上述含有玉蜀黍黑粉菌菌株的液體培養基在黑暗條件下振蕩培養16-20h，用酶標儀測量最終OD₂；

3)計算各處理菌液OD的增長值ΔOD，計算抑制率；以殺菌劑有效成分濃度的對數值為自變量，抑制率幾率值為因變量，計算毒力回歸方程，并求出抑制中濃度EC₅₀。

優選的，本發明步驟1)中所述玉蜀黍黑粉菌菌株的活化步驟為：將玉蜀黍黑粉菌菌株接種在馬鈴薯葡萄糖液體培養基中，在黑暗條件下振蕩活化培養得到活化菌株。

進一步優選的，本發明步驟1)中所述振蕩活化培養的溫度為25℃-28℃，頻率為150-250r/min，時間為16-20h。

優選的，本發明步驟2)中所述OD₂值的范圍在0.8-1之間。

優選的，本發明步驟2)中所述振蕩培養的溫度為25℃-28℃，頻率為150-250r/min。