[發明專利]一種食用菌傘菌類擔孢子的分離方法及應用

在審

• 申請號: 201910753351.2
• 申請日: 2019-08-15
• 公開（公告）號: CN110438014A
• 公開（公告）日: 2019-11-12
• 發明（設計）人: 楊菁;肖冬來;張迪;黃小菁
• 申請（專利權）人: 福建省農業科學院食用菌研究所（福建省蘑菇菌種研究推廣站）
• 主分類號: C12N1/14
• 分類號: C12N1/14;C12N1/02;C12R1/645
• 代理公司: 福州科揚專利事務所 35001
• 代理人: 嚴歡

本發明涉及一種食用菌傘菌類擔孢子的分離方法和應用，包括以親本的選擇、擔孢子的收集、純菌絲體的獲得和單雙核菌絲確認等步驟；本發明以物理方式簡易快速收集擔孢子，使得擔孢子收集過程由2天縮短至20?30min，且能夠克服因生長發育時間、溫度不適宜造成孢子難以釋放的因素，減少了污染率，高效便捷地獲得擔孢子。

技術領域

本發明屬于食用菌育種技術領域，具體涉及一種食用菌傘菌擔孢子的分離方法及應用。

背景技術

我國是世界食用菌栽培大國，是世界上食用菌栽培種類最多，產量最高的國家。食用菌的生產是一個涉及到菌種、培養料、生長環境和栽培技術等諸多方面的栽培體系，在滿足食用菌生產的諸多環節因素中，優質、高產、抗逆性強的菌種是一個最重要的因素，具有優良基因綜合性狀的栽培品種的菌種純培養是食用菌產業優質發展的保障。在生產實踐中多用菌種分離獲得所需菌種，食用菌菌種分離就是在無菌條件下將所需要的食用菌與其他微生物分開，在適宜條件下培養以獲得純培養的過程，獲得食用菌純培養方法因分離材料性質不同而分為組織分離法、孢子分離法、基內菌絲分離法三種。其中，孢子分離法在食用菌育種中使用較為普遍。孢子分離法是利用食用菌成熟的有性孢子在適宜的培養基上萌發成菌絲體，進而獲得的純培養的方法。一個食用菌子實體可以形成上億的有性孢子，即擔孢子，數量眾多的擔孢子其遺傳特性變異數量也較大，因此是良種選育的好材料。

傳統的孢子分離法是依靠自身的生物特性彈射獲取擔孢子，獲得的擔孢子經過萌發形成純菌絲體，常規的孢子分離法存在著擔孢子良莠不齊的狀況，孢子彈射后收集擔孢子需要24-48h，花費時間長，且操作上易發生污染等問題。現有技術中已經有較多裝置用于輔助孢子分離，專利號為CN105969654B的中國專利公開了一種真菌孢子洗篩過濾器及真菌孢子分離方法，利用洗篩瓶以及水流的作用進行真菌孢子的分離和收集，但是該裝置和方法容易造成孢子污染等問題；專利號為CN201770697U的中國專利公開了一種真菌孢子分離機，包括物料粉碎機、沉降分離器、氣流循環系統和風機，能夠滿足實驗室真菌分離量小批次多品種復雜，但是，操作復雜。

發明內容

本發明的目的在于提供一種食用菌傘菌擔孢子的分離方法和應用，以物理方式簡易快速收集擔孢子，使得擔孢子收集過程由2天縮短至20-30min，且能夠克服因生長發育時間、溫度不適宜造成孢子難以釋放的因素，減少了污染率，高效便捷地獲得擔孢子。

一種食用菌傘菌類擔孢子的分離方法，具體步驟如下：

（1）親本的選擇：根據育種目標選擇八分熟的子實體作為種菇；

（2）擔孢子的收集：無菌操作切開子實體菌蓋，切取菌褶，將菌褶放入無菌水中制成擔孢子懸液；

（3）純菌絲體的獲得：將擔孢子懸液制成不同梯度的孢子懸液，進行平板培養，待孢子萌發，挑取生長良好的單菌落，獲得純菌絲體；

（4）單雙核菌絲確認：經過步驟（3）獲得的純菌絲體在顯微鏡下進行鏡檢，根據有無鎖狀聯合，辨別雙核菌絲體和單核菌絲體。

進一步的，所述步驟（2）中菌褶位于菌蓋與菌柄連接處，切取菌褶1-2mm，菌褶置于含有無菌水的試管中，需經過超聲波清洗器振蕩15~30min制成擔孢子懸液。

進一步的，所述步驟（3）中通過十倍稀釋法稀釋擔孢子懸液制成10^-1、10^-2、10^-3、10^-4、10^-5不同梯度濃度的孢子懸液。

進一步的，將經過步驟（3）制得的各梯度濃度孢子懸液進行平板培養，在23~25℃條件下培養7~10天孢子萌發，進而挑取生長良好的單菌落，獲得純菌絲體。

進一步的，所述步驟（4）單雙核菌絲確認的具體步驟如下：