[發明專利]一種食用菌傘菌類擔孢子的分離方法及應用

在審

• 申請號: 201910753351.2
• 申請日: 2019-08-15
• 公開（公告）號: CN110438014A
• 公開（公告）日: 2019-11-12
• 發明（設計）人: 楊菁;肖冬來;張迪;黃小菁
• 申請（專利權）人: 福建省農業科學院食用菌研究所（福建省蘑菇菌種研究推廣站）
• 主分類號: C12N1/14
• 分類號: C12N1/14;C12N1/02;C12R1/645
• 代理公司: 福州科揚專利事務所 35001
• 代理人: 嚴歡

1.一種食用菌傘菌類擔孢子的分離方法，其特征在于，具體步驟如下：

（1）親本的選擇：根據育種目標選擇八分熟的子實體作為種菇；

（2）擔孢子的收集：無菌操作切開子實體菌蓋，切取菌褶，將菌褶放入無菌水中制成擔孢子懸液；

（3）純菌絲體的獲得：將擔孢子懸液制成不同梯度的孢子懸液，進行平板培養，待孢子萌發，挑取生長良好的單菌落，獲得純菌絲體；

（4）單雙核菌絲確認：經過步驟（3）獲得的純菌絲體在顯微鏡下進行鏡檢，根據有無鎖狀聯合，辨別雙核菌絲體和單核菌絲體。

2.如權利要求1所述的一種食用菌傘菌類擔孢子的分離方法，其特征在于：所述步驟（2）中菌褶位于菌蓋與菌柄連接處，切取菌褶1-2mm，菌褶置于含有無菌水的試管中，需經過超聲波清洗器振蕩15~30min制成擔孢子懸液。

3.如權利要求1所述的一種食用菌傘菌類擔孢子的分離方法，其特征在于：所述步驟（3）中通過十倍稀釋法稀釋擔孢子懸液制成10^-1、10^-2、10^-3、10^-4、10^-5不同梯度濃度的孢子懸液。

4.如權利要求3所述的一種食用菌傘菌類擔孢子的分離方法，其特征在于：將經過步驟（3）制得的各梯度濃度孢子懸液進行平板培養，在23~25℃條件下培養7~10天孢子萌發，進而挑取生長良好的單菌落，獲得純菌絲體。

5.如權利要求1所述的一種食用菌傘菌類擔孢子的分離方法，其特征在于：所述步驟（4）單雙核菌絲確認的具體步驟如下：

S1、在PDA培養基的平板上接種純菌絲體，在23~25℃條件下培養3~5天，在距菌絲生長點前端傾斜插入蓋玻片繼續培養；

S2、待菌絲爬至2/5~3/5插片時，將已爬壁的菌絲蓋玻片取出，扣于載玻片上，使得菌絲面朝下；

S3、將載玻片置于顯微鏡下，觀察菌絲核相，確定單雙核菌株。

6.如權利要求5所述的一種食用菌傘菌類擔孢子的分離方法，其特征在于：所述步驟S1中在距菌絲前端處以30~60°斜插入蓋玻片。

7.如權利要求1至6任一所述的一種食用菌傘菌類擔孢子的分離方法，其特征在于：適用于姬松茸、大球蓋菇或香菇系食用菌傘菌類擔孢子的分離及選育工作。