[發明專利]鴿新城疫病毒LAMP-TaqMan檢測試劑盒

在審

• 申請號: 201910753231.2
• 申請日: 2019-08-15
• 公開（公告）號: CN110305988A
• 公開（公告）日: 2019-10-08
• 發明（設計）人: 崔尚金;梁琳;梁瑞英;賈亞雄;陳余
• 申請（專利權）人: 中國農業科學院北京畜牧獸醫研究所
• 主分類號: C12Q1/70
• 分類號: C12Q1/70;C12Q1/6844;C12N15/11
• 代理公司: 北京路浩知識產權代理有限公司 11002
• 代理人: 陳征

1.鴿新城疫病毒LAMP-TaqMan檢測試劑盒，其特征在于，所述試劑盒含有6條特異性引物和1條TaqMan探針，其以鴿新城疫病毒NDV F基因為靶基因，所述靶基因的核苷酸序列如SEQ ID NO.8所示；所述6條特異性引物分別為兩條外引物，兩條內引物、兩條環引物。

2.如權利要求1所述的檢測試劑盒，其特征在于，

所述兩條外引物為：

NVDF2 F3：5’-TCATTAATAGGCAGTGGCT-3’

NVDF2 B3：5’-TGTACAGTATAGATCCtGATC-3’；

兩條內引物為：

NVDF2 FIP：

5’-AGGTTCCCGACTGAGGGTACTGTATGACTCACAGACTC-3’

NVDF2 BIP：

5’-TTGCCTCAGCACTTGTCCGGTGTCAAGTTCTTCTATCAC-3’；

兩條環引物為：

NVDF2 LoopF：5’-AATTTACCTGGATGCCCAAG-3’

NVDF2 LoopB：5’-CGAAGGTAGTGACACAAGTC-3’。

3.如權利要求1所述的檢測試劑盒，其特征在于，所述1條TaqMan探針為：

5’-GTGCCACCTACCTGGAAACTTTATCTGTAAGCACAA-3’。

4.根據權利要求1-3任一所述的試劑盒，其特征在于，所述引物和探針濃度分別為：引物NVDF2 F3:2μM和NVDF2 B3:2μM，NVDF2 LoopF:8μM和NVDF2 LoopB:8μM，NVDF2 FIP:16μM和NVDF2 BIP:16μM以及熒光探針8μM。

5.根據權利要求4所述的試劑或試劑盒，其特征在于，其還包括dNTP，Bst5.0聚合酶、海藻糖，陰性對照、陽性對照。

6.一種檢測鴿新城疫病毒的引物探針組合，其特征在于，含有6條特異性引物和1條TaqMan探針，所述6條特異性引物分別為兩條外引物，兩條內引物、兩條環引物；其核苷酸序列分別如SEQ ID NO.1-6所示；所述TaqMan探針的核苷酸序列如SEQ ID NO.7所示，所述探針兩端分別標記有熒光報告基團和熒光淬滅基團。

7.權利要求6所述的引物探針組合在制備檢測鴿新城疫病毒試劑盒中的應用。

8.一種檢測鴿新城疫病毒LAMP-TaqMan的方法，其特征在于，以待檢樣品的基因組DNA為模板，以權利要求6所述的引物探針組合對模板進行LAMP-TaqMan檢測，使用恒溫熒光設備或標準定量PCR儀收集FAM熒光信號，曲線上升的樣本判定為陽性結果，曲線沒有上升的判定為陰性結果。

9.如權利要求8所述的方法，其特征在于，所述LAMP-TaqMan檢測的檢測體系中，引物NVDF2 F3:2μM和NVDF2 B3:2μM，NVDF2 LoopF:8μM和NVDF2 LoopB:8μM，NVDF2 FIP:16μM和NVDF2 BIP:16μM以及熒光探針8μM。

10.如權利要求8所述的方法，其特征在于，所述LAMP-TaqMan檢測的方法為：65℃10s；65℃50s，收集信號，循環25次，總反應時間為25min。