[發(fā)明專利]細(xì)胞松弛素類化合物、其制備方法及應(yīng)用

有效

• 申請?zhí)枺?/td>: 201910745691.0
• 申請日: 2019-08-13
• 公開（公告）號: CN110526858B
• 公開（公告）日: 2021-02-02
• 發(fā)明（設(shè)計(jì)）人: 郭慶豐;陳林;尹震花;張娟娟;康文藝
• 申請（專利權(quán)）人: 黃河科技學(xué)院
• 主分類號: C07D209/96
• 分類號: C07D209/96;A61P35/00;A61K31/404;C12N1/14;C12P17/16;C12R1/645
• 代理公司: 鄭州聯(lián)科專利事務(wù)所(普通合伙) 41104
• 代理人: 付艷麗

本發(fā)明屬于微生物及其天然產(chǎn)物的應(yīng)用技術(shù)領(lǐng)域，具體涉及一種細(xì)胞松弛素類化合物、其制備方法及應(yīng)用。本發(fā)明通過利用馬德里毛殼菌為原料進(jìn)行細(xì)胞松弛素類化合物的制備，所采用的方法具有選擇性高、環(huán)境友好等特點(diǎn)，得到的粗提物浸膏的產(chǎn)率高，且提取方法簡單、成本低，制備的細(xì)胞松弛素類化合物的純度可達(dá)99.8%，所述細(xì)胞松弛素類化合物在制備抗人肝癌HepG2、人非小細(xì)胞肺癌A549腫瘤藥劑中具有較佳的應(yīng)用效果，同時(shí)還能夠誘導(dǎo)非小細(xì)胞肺癌細(xì)胞凋亡，具有良好的應(yīng)用前景。

技術(shù)領(lǐng)域

本發(fā)明屬于微生物及其天然產(chǎn)物的應(yīng)用技術(shù)領(lǐng)域，具體涉及一種細(xì)胞松弛素類化合物、其制備方法及應(yīng)用。

背景技術(shù)

根據(jù)世界衛(wèi)生組織的最新實(shí)況報(bào)道，腫瘤即癌癥是世界第二大死因，惡性腫瘤是威脅人類健康的常見病和多發(fā)病，2018年全球新發(fā)惡性腫瘤病例約為1800萬例，死亡病例高達(dá)960萬例。

微生物代謝產(chǎn)物由于化學(xué)結(jié)構(gòu)多樣、活性廣泛的等特點(diǎn)，并且在細(xì)胞內(nèi)能與多種特異性靶點(diǎn)相互作用，是發(fā)現(xiàn)靶向特定藥物或藥物先導(dǎo)化合物的重要來源之一。通過挖掘天然產(chǎn)物有效成分或者對其部分結(jié)構(gòu)進(jìn)行修飾，以尋找療效更好、更適用的抗腫瘤藥物的研發(fā)工作具有重大意義。

細(xì)胞松弛素是一類具有顯著生物學(xué)功能的真菌多聚氨基酸雜合次級代謝產(chǎn)物，同時(shí)也是一種具有高度取代的異吲哚酮衍生物。其典型的結(jié)構(gòu)特點(diǎn)具有一個(gè)三環(huán)骨架結(jié)構(gòu)，其中一個(gè)大環(huán)駢和在異吲哚酮骨架上，根據(jù)駢和在聚酮骨架上氨基酸的類型不同，以及大環(huán)的類型、碳原子數(shù)、大環(huán)上取代基的不同決定了細(xì)胞松弛素的種類的豐富和結(jié)構(gòu)的多樣。研究發(fā)現(xiàn)，該類化合物具有廣泛的抗腫瘤、抗菌、抗病毒等生物活性。

發(fā)明內(nèi)容

本發(fā)明的目的是提供一種利用馬德里毛殼菌制備細(xì)胞松弛素類化合物的方法。

本發(fā)明還進(jìn)一步提供了所述細(xì)胞松弛素類化合物在制備抗腫瘤藥劑中的應(yīng)用。

為實(shí)現(xiàn)上述目的，本發(fā)明所用的菌種為分離自新疆和田市地區(qū)的荒漠土壤中一株菌，其保藏的分類學(xué)名稱為馬德里毛殼菌Chaetomium madrasense CLC375，并保藏于中國典型培養(yǎng)物保藏中心，保藏地址：中國.武漢.武漢大學(xué)；保藏日期：2019年7月3日，保藏號為:CCTCC M2019517。

本發(fā)明從馬德里毛殼菌中分離提取得到次級代謝產(chǎn)物-細(xì)胞松弛素類化合物，其結(jié)構(gòu)式如下：

所述細(xì)胞松弛素類化合物通過以下步驟制得：

(1)菌種活化：將馬德里毛殼菌接種到SDAY平板培養(yǎng)基上，25～30℃下培養(yǎng)5d～7d，得到活化菌種；

(2)發(fā)酵培養(yǎng)：將步驟(1)中得到的活化菌種接種到大米固體培養(yǎng)基中，25℃靜置培養(yǎng)28d，得發(fā)酵物；

(3)乙酸乙酯浸提：將步驟(2)得到的發(fā)酵物用乙酸乙酯浸提，浸提液減壓濃縮并回收乙酸乙酯，得粗提物浸膏；

(4)粗提物柱層析分離：將步驟(3)得到的粗提物浸膏以二氯甲烷：甲醇體積比分別為100:1、50:1、10:1、1:1進(jìn)行梯度洗脫，經(jīng)薄層層析檢測，得到6個(gè)流份，并編號為Fr.1-Fr.6，再利用硅膠柱層析法或葡聚糖凝膠柱層析分離得到粗產(chǎn)物，并利用半制備反相高效液相法進(jìn)行純化，得到所述細(xì)胞松弛素類化合物。

具體的，步驟(2)中所述大米培養(yǎng)基的制備：取50-70g大米，100mL水，在121℃高壓滅菌25-30min。

具體的，步驟(3)中所述乙酸乙酯浸提的過程如下：將步驟(2)得到的發(fā)酵物中加入300mL乙酸乙酯，使用玻璃棒將發(fā)酵物攪拌成顆粒狀，使溶劑與發(fā)酵物充分接觸，放置12～16h過濾，三次浸提后，合并三次的浸提液，將浸提液減壓濃縮得粗提物浸膏。