[發明專利]細胞松弛素類化合物、其制備方法及應用有效
| 申請號： | 201910745691.0 | 申請日： | 2019-08-13 |
| 公開（公告）號： | CN110526858B | 公開（公告）日： | 2021-02-02 |
| 發明（設計）人： | 郭慶豐;陳林;尹震花;張娟娟;康文藝 | 申請（專利權）人： | 黃河科技學院 |
| 主分類號： | C07D209/96 | 分類號： | C07D209/96;A61P35/00;A61K31/404;C12N1/14;C12P17/16;C12R1/645 |
| 代理公司： | 鄭州聯科專利事務所(普通合伙) 41104 | 代理人： | 付艷麗 |
| 地址： | 450005 河*** | 國省代碼： | 河南;41 |
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| 摘要： | |||
| 搜索關鍵詞： | 細胞松弛素 化合物 制備 方法 應用 | ||
1.一種利用馬德里毛殼菌制備細胞松弛素類化合物的方法，其特征在于，所述細胞松弛素類化合物結構式如下：
；
所述細胞松弛素類化合物用于制備抗腫瘤藥劑，所述腫瘤為人肝癌細胞HepG2；
所述方法包括以下步驟：
（1）菌種活化：將馬德里毛殼菌接種到SDAY平板培養基上，25~30℃下培養5d~7d，得到活化菌種；
（2）發酵培養：將步驟（1）中得到的活化菌種接種到大米固體培養基中，25~30℃靜置培養24~28d，得發酵物；
（3）乙酸乙酯浸提：將步驟（2）得到的發酵物用乙酸乙酯浸提，浸提液濃縮得粗提物浸膏；
（4）粗提物柱層析分離：將步驟（3）得到的粗提物浸膏以二氯甲烷：甲醇體積比分別為100:1、50:1、10:1、1:1進行梯度洗脫，經薄層層析檢測，得到6個流份，并編號為Fr.1 -Fr.6，再利用硅膠柱層析法或葡聚糖凝膠柱層析分離得到粗產物，并利用半制備反相高效液相法進行純化，得到所述細胞松弛素類化合物；
所述馬德里毛殼菌保藏的分類學名稱為馬德里毛殼菌
步驟（3）中所述乙酸乙酯浸提的過程如下：將步驟（2）得到的發酵物中加入300mL乙酸乙酯，攪拌，放置12~16h后過濾，重復以上浸提方法三次后，合并三次的浸提液，將浸提液減壓濃縮得粗提物浸膏；
步驟（4）中Fr. 6使用ODS反相硅膠柱層析，得到5個組分Fr. 6.1 - Fr. 6.5；將得到的流份Fr.6.2使用葡聚糖凝膠柱層析，以甲醇為溶劑進行洗脫得到產物，最后再使用半制備反相高效液相法進行純化，得到化合物2；
所述化合物2半制備反相高效液相純化方法為：選用YMC為色譜柱，色譜柱規格為10 mm× 250 mm，5 μm；流動相為乙腈和水，乙腈與水的體積比為30:70；流速為2mL/min；檢測波長為220, 254；保留時間為 30.7 min。
2.根據權利要求1所述的方法，其特征在于，步驟（2）中所述大米培養基的制備：取50-70g大米，100m L水，在121℃高壓滅菌25-30min。
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