[發明專利]從箬竹葉中提取抗真菌黃酮組分的方法及應用

在審

• 申請號: 201910744907.1
• 申請日: 2019-08-13
• 公開（公告）號: CN110372655A
• 公開（公告）日: 2019-10-25
• 發明（設計）人: 胡國元;鄧龍興;楊春雷;余君;覃光炯;楊錦鵬
• 申請（專利權）人: 武漢工程大學
• 主分類號: C07D311/30
• 分類號: C07D311/30;C07D311/40;A01N43/16;A01P3/00
• 代理公司: 湖北武漢永嘉專利代理有限公司 42102
• 代理人: 崔友明;閉釗

本發明涉及一種從箬竹葉中提取抗真菌黃酮組分的方法及應用。首先將一定粒徑的箬竹葉粉體與冰乙酸、乙醇的水溶液混合進行閃式提取并干燥，得到箬竹葉黃酮粗提物；接著依次用石油醚和乙酸乙酯對粗提取物進行萃取，然后分兩次用不同的洗脫液對萃取產物進行柱層析分離，期間篩選出抗菌能力較強的洗脫液并干燥，最終得到目標產物。實驗表明，提取得到的粗產物及最終產物能夠顯著抑制煙草鏈格孢菌的孢子萌發以及煙草鏈格孢菌、煙草疫霉菌絲生長。本發明為箬竹葉資源的開發利用提供了一種新的途徑，其作為植物源農藥原材料具有較好的應用前景。

技術領域

本發明涉及農業及生物醫藥技術領域，具體涉及一種從箬竹葉中提取抗真菌黃酮組分的方法及應用。

背景技術

箬竹在我國分布廣泛，文獻記載箬竹葉具有較高的藥用價值。從箬竹葉中提取到的活性成分具有良好的抗氧化性、抗菌活性和抗癌作用，尤其是其中所含的黃酮組分，對于植物病原細菌、真菌具有較好的抑制作用。如果能以簡單、高效的方法從箬竹葉中提取出純度較高的黃酮組分并充分利用其抗菌特性，必將產生較好的經濟和社會效益。

目前關于箬竹葉中黃酮組分的研究較少，相關分離純化路線的研究尚不深入，還沒有較為成熟的工業化全合成或半合成方法被公開報道過。檢索發現，目前對于箬竹葉的利用主要在于提煉其中的揮發性油并制成香精或香料，例如中國專利CN103074159A、CN104307016A、CN104130862A分別公開了不同的箬竹葉揮發性油提取方法。這些技術方案中分別采用了乙醚-水蒸氣蒸餾法、乙醇萃取法、纖維素酶發酵-乙醇萃取法對箬竹葉中的有效成分進行了提取。也有一些文獻公開了利用乙二醇-氯化鉀復合萃取液、石油醚、乙醚、乙酸乙酯等從箬竹葉中提取總黃酮的方法。

綜合檢索到的文獻，箬竹葉的傳統溶劑提取法主要有煎煮法、浸漬法、回流法、連續回流法、滲漉法等。由于天然產物結構和性質較為復雜，上述方法普遍存在提取率低、周期長、花費成本高、操作復雜等問題。現代提取方法主要有超聲波提取、微波萃取、閃式提取和酶解法等，其中閃式提取法是近年來發展起來的一種新的提取方法。閃式提取技術以組織破碎提取原理為核心理論依據，在室溫和適當溶劑存在前提下，利用高速破碎、高速攪拌和超分子滲透技術，將材料的組織器官在數秒至幾分鐘時間內破碎、研磨至細微顆粒，再通過細胞組織的破裂和組織外圍溶劑的快速滲透、溶解，使藥材組織細胞內的目標生物活性成分以最快的速度、最低的能耗、最大的收率迅速從細胞中解離出來進入溶劑體系中，實現藥材組織細胞內外有效成分分子濃度的平衡。閃式提取不會破壞藥材中的熱敏成分，能實現快速綠色提取的效果。

我們采用不同溶劑分別利用振蕩浸漬法、超聲波提取法、閃式提取法從箬竹葉中提取抗真菌黃酮組分，并比較了不同方法的提取率、抗菌活性以及溶劑回收率等，所有結果都表明本發明方法是一種高效、低耗的綠色提取箬葉黃酮方法。

發明內容

本申請的目的在于提供一種從箬竹葉中提取抗真菌黃酮組分的方法，具體過程如下：(a)采集來的箬竹葉經洗凈、干燥、粉碎、過篩處理，得到箬竹葉粉末；(b)將箬竹葉粉末加入到包含有機酸、有機醇、水等成分的復合提取液中，浸泡一段時間后進行閃式提取，接著固液分離，得到濾液和濾渣；(c)濾渣按照步驟(b)中的方法再次進行浸泡、閃式提取，固液分離后合并濾液，濃縮濾液得到箬竹葉黃酮粗提物；(d)將箬竹葉黃酮粗提物分散在水中，依次用石油醚、乙酸乙酯萃取，合并萃取液并干燥，得到箬竹葉黃酮粗萃取物；(e)將箬竹葉黃酮粗萃取物裝填到硅膠柱中進行柱層析分離，篩選得到抗真菌黃酮組分。

進一步的，步驟(a)中箬竹葉粉末的粒徑為20-100目。

進一步的，步驟(b)中箬竹葉粉末與復合提取液的用量比為1g:5-40mL，浸泡時間為10-90min，所使用的閃式提取器電壓為100-150V，提取時間為30-90s。

進一步的，步驟(b)所述復合提取液中有機酸、有機醇、水的體積比為1-15:0.5-8:2-25，所述有機酸具體為冰乙酸，所述有機醇具體為無水乙醇。