[發明專利]從箬竹葉中提取抗真菌黃酮組分的方法及應用

在審

• 申請號: 201910744907.1
• 申請日: 2019-08-13
• 公開（公告）號: CN110372655A
• 公開（公告）日: 2019-10-25
• 發明（設計）人: 胡國元;鄧龍興;楊春雷;余君;覃光炯;楊錦鵬
• 申請（專利權）人: 武漢工程大學
• 主分類號: C07D311/30
• 分類號: C07D311/30;C07D311/40;A01N43/16;A01P3/00
• 代理公司: 湖北武漢永嘉專利代理有限公司 42102
• 代理人: 崔友明;閉釗

1.一種從箬竹葉中提取抗真菌黃酮組分的方法，其特征在于包括以下步驟：

(a)采集來的箬竹葉經洗凈、干燥、粉碎、過篩處理，得到箬竹葉粉末；

(b)將箬竹葉粉末加入到包含有機酸、有機醇、水的復合提取液中，浸泡一段時間后進行閃式提取，接著固液分離，得到濾液和濾渣；

(c)濾渣按照步驟(b)中的方法再次進行浸泡、閃式提取，固液分離后合并濾液，濃縮濾液得到箬竹葉黃酮粗提物；

(d)將箬竹葉黃酮粗提物分散在水中，依次用石油醚、乙酸乙酯萃取，合并萃取液后干燥，得到箬竹葉黃酮粗萃取物；

(e)將箬竹葉黃酮粗萃取物裝填到硅膠柱中進行柱層析分離，篩選得到抗真菌黃酮組分。

2.如權利要求1所述的方法，其特征在于：步驟(a)中箬竹葉粉末的粒徑為20-100目。

3.如權利要求1所述的方法，其特征在于：步驟(b)中箬竹葉粉末與復合提取液的用量比為1g:5-40mL，浸泡時間為10-90min，所使用的閃式提取器電壓為100-150V，提取時間為30-90s。

4.如權利要求1所述的方法，其特征在于：步驟(b)所述復合提取液中有機酸、有機醇、水的體積比為1-15:0.5-8:2-25，所述有機酸為冰乙酸，所述有機醇為無水乙醇。

5.如權利要求1所述的方法，其特征在于：步驟(c)中合并所得濾液首先在45-65℃多級閃蒸器中濃縮至一定體積，再用旋轉蒸發儀于40-55℃減壓濃縮至浸膏狀，接著用足量無水乙醇將浸膏溶解，固液分離后將濾液轉移至旋轉蒸發儀中于40-55℃再次減壓濃縮至浸膏狀，得到箬竹葉黃酮粗提物。

6.如權利要求1所述的方法，其特征在于：步驟(e)中所使用的硅膠顆粒為200-300目，硅膠與待層析物的質量用量比為20:1-4，洗脫劑與硅膠的體積比為3:1-3。

7.如權利要求1所述的方法，其特征在于：步驟(e)中至少進行了兩次柱層析分離，第一次柱層析分離所使用的系列洗脫劑由甲醇與三氯甲烷按照y:(10-y)的體積比混合而成，操作時按照洗脫劑中甲醇含量遞增的順序依次洗脫，y的取值范圍為0≤y≤10；第二次柱層析分離所使用的系列洗脫劑由石油醚與乙酸乙酯按照0-9:1的體積比混合而成，操作時按照洗脫劑中石油醚含量遞增的順序依次洗脫。

8.如權利要求7所述的方法，其特征在于：第一次柱層析分離完成后收集洗脫液，對其進行薄層層析分離，合并相同R_f值的洗脫液，接著測定各洗脫液的抗菌活性，將活性最高的洗脫液裝填到硅膠柱中進行第二次柱層析分離；第二次柱層析分離完成后收集洗脫液，對其進行薄層層析分離，合并相同R_f值的洗脫液，接著測定各洗脫液的抗菌活性，將活性最高的洗脫液干燥即可。

9.如權利要求1所述的方法，其特征在于：箬竹葉粉末與復合提取液的用量比為1g:7mL，浸泡時間為40min，閃式提取電壓為120V，閃式提取時間為40s；硅膠與待層析物的質量用量比為20:1，兩次柱層析分離過程中洗脫劑與硅膠的體積比分別為2:1和1:1。

10.按照權利要求1-9中任一種方法從箬竹葉中提取到的抗真菌黃酮組分在抑制煙草鏈格孢菌和煙草疫霉方面的應用。