[發(fā)明專利]構(gòu)建DNA文庫的方法及其應(yīng)用在審
| 申請?zhí)枺?/td> | 201910740285.5 | 申請日： | 2019-08-12 |
| 公開（公告）號： | CN110607352A | 公開（公告）日： | 2019-12-24 |
| 發(fā)明（設(shè)計(jì)）人： | 陳曉丹;徐護(hù)朝;潘偉業(yè);李志民;李大為;玄兆伶;王海良;王娟 | 申請（專利權(quán)）人： | 安諾優(yōu)達(dá)生命科學(xué)研究院;浙江安諾優(yōu)達(dá)生物科技有限公司;安諾優(yōu)達(dá)(義烏)醫(yī)學(xué)檢驗(yàn)有限公司;北京安諾優(yōu)達(dá)醫(yī)學(xué)檢驗(yàn)實(shí)驗(yàn)室有限公司;安諾優(yōu)達(dá)基因科技(北京)有限公司 |
| 主分類號： | C12Q1/6806 | 分類號： | C12Q1/6806;C12N15/10;C40B50/06 |
| 代理公司： | 暫無信息 | 代理人： | 暫無信息 |
| 地址： | 322000 浙江省金華市義烏*** | 國省代碼： | 浙江;33 |
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| 摘要： | |||
| 搜索關(guān)鍵詞： | 標(biāo)記物 嵌合 轉(zhuǎn)座 捕獲 構(gòu)建 三維結(jié)構(gòu)信息 文庫構(gòu)建 有效數(shù)據(jù) 痕量DNA 單末端 測序 建庫 擴(kuò)增 耗時(shí) 樣本 噪音 懸掛 應(yīng)用 | ||
1.一種構(gòu)建DNA文庫的方法，其特征在于，包括：
提供嵌合標(biāo)記物的DNA，其中，所述嵌合標(biāo)記物的DNA具有三維結(jié)構(gòu)信息；
將所述嵌合標(biāo)記物的DNA進(jìn)行轉(zhuǎn)座處理，以便得到轉(zhuǎn)座產(chǎn)物；
對所述轉(zhuǎn)座產(chǎn)物進(jìn)行捕獲處理，以便得到捕獲后的DNA；以及
將所述捕獲后的DNA進(jìn)行擴(kuò)增處理，以便獲得所述DNA文庫。
2.根據(jù)權(quán)利要求1所述的方法，其特征在于，所述標(biāo)記物為生物素。
3.根據(jù)權(quán)利要求1所述的方法，其特征在于，所述嵌合標(biāo)記物的DNA含有空間上相鄰近的DNA區(qū)段的部分。
4.根據(jù)權(quán)利要求1所述的方法，其特征在于，獲得所述嵌合標(biāo)記物的DNA的方法包括：
將細(xì)胞內(nèi)的染色質(zhì)進(jìn)行固定交聯(lián)處理，以形成DNA-蛋白質(zhì)交聯(lián)物；
將DNA-蛋白質(zhì)交聯(lián)物進(jìn)行酶切處理，以生成含有粘性末端的DNA-蛋白質(zhì)復(fù)合物；以及
用含有一種或多種所述標(biāo)記物的核苷酸補(bǔ)平所述粘性末端，產(chǎn)生平末端隨后使平末端連接在一起，形成鄰近連接的基因組DNA。
5.根據(jù)權(quán)利要求1所述的方法，其特征在于，利用轉(zhuǎn)座酶進(jìn)行所述轉(zhuǎn)座處理。
6.根據(jù)權(quán)利要求4所述的方法，其特征在于，所述轉(zhuǎn)座酶為Tn5轉(zhuǎn)座酶。
7.根據(jù)權(quán)利要求4所述的方法，其特征在于，所述嵌合標(biāo)記物的DNA與所述轉(zhuǎn)座酶的比例為10ng：50-100nM。
8.根據(jù)權(quán)利要求4所述的方法，其特征在于，基于10ng所述嵌合標(biāo)記物的DNA，所述轉(zhuǎn)座處理的反應(yīng)體系包括：
8-12μl轉(zhuǎn)座緩沖液；
0.2-1μL10％吐溫20；
7-10μL水；以及
0.5-3μl所述轉(zhuǎn)座酶。
9.根據(jù)權(quán)利要求4所述的方法，其特征在于，所述轉(zhuǎn)座處理的溫度為50-60℃，時(shí)間為5-15分鐘。
11.一種獲得個(gè)體細(xì)胞內(nèi)染色質(zhì)相互作用信息的方法，其特征在于，包括：
利用權(quán)利要求1-10任一項(xiàng)所述的構(gòu)建DNA文庫的方法，以便得到所述個(gè)體的DNA文庫；以及
對所述DNA文庫進(jìn)行測序和分析，以便獲得所述個(gè)體細(xì)胞內(nèi)染色質(zhì)相互作用信息。
12.一種獲得個(gè)體生物信息的方法，其特征在于，包括：
利用權(quán)利要求1-10任一項(xiàng)所述的構(gòu)建DNA文庫的方法，以便得到所述個(gè)體的DNA文庫；以及
對所述DNA文庫進(jìn)行測序和分析，以便獲得所述個(gè)體生物信息。
13.一種三維基因組研究方法，其特征在于，所述方法是通過權(quán)利要求1-10所述的構(gòu)建DNA文庫的方法或權(quán)利要求11所述的獲得個(gè)體細(xì)胞內(nèi)染色質(zhì)相互作用信息的方法或權(quán)利要求12所述的獲得個(gè)體生物信息的方法進(jìn)行的。
15.一種試劑盒，其特征在于，包括：權(quán)利要求1-10所述的構(gòu)建DNA文庫的方法中所使用的試劑、引物、介導(dǎo)片段或其中至少一項(xiàng)的組合。
16.權(quán)利要求15所述的試劑盒在三維基因組建庫或產(chǎn)前診斷或癌癥篩查中的用途。
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