[發明專利]人體液中抗CASPR2自身抗體的檢測材料、制備方法及應用

有效

• 申請號: 201910738486.1
• 申請日: 2019-08-12
• 公開（公告）號: CN110606886B
• 公開（公告）日: 2021-06-01
• 發明（設計）人: 閆亞平;李怡婷;馮昆;李科
• 申請（專利權）人: 陜西脈元生物科技有限公司
• 主分類號: C07K14/705
• 分類號: C07K14/705;C07K1/14;C12N15/867;G01N33/531;G01N33/564
• 代理公司: 西安恒泰知識產權代理事務所 61216
• 代理人: 李婷;金艷婷

本發明公開了人體液中抗CASPR2自身抗體的檢測材料、制備方法及應用，本發明將CASPR2抗原包被于NC膜上制成抗CASPR2受體檢測材料，人血清和腦脊液中的特異性CASPR2抗體會與抗原結合，利用堿性磷酸酶底物?配體反應進行顯色，并在顯色反應中加入本發明的封閉材料，可用通過肉眼觀察直接判斷檢測樣品中是否含有CASPR2抗體。該方法具有靈敏度高，操作簡便，快速檢測等優點，有助于抗CASPR2受體腦炎的識別和診斷。

技術領域

本發明屬于生物醫藥技術領域，具體涉及一種人體液中抗CASPR2自身抗體的檢測材料、制備方法及應用。

背景技術

接觸蛋白相關蛋白2(Contactin Associated Protein Like 2，CASPR2)屬于軸突蛋白家族，該蛋白在神經系統發育過程中介導神經元和神經膠質之間的相互作用，并且還參與分化軸突內鉀離子電壓門通道(Voltage-gated potassium channel，VGKC)的定位。該蛋白涉及多種神經發育障礙，包括Morvan綜合征，精神分裂癥，癲癇，自閉癥，智力殘疾和自身免疫腦炎。2010年Irani和Lai等人發現，以往被稱為VGKC腦炎的疾病，其實際上的致病性抗體是針對CASPR2，而并非VGKC本身，并將CASPR2抗體自身陽性腦炎命名為抗CASPR2自身免疫邊緣性腦炎(以下簡稱為抗CASPR2腦炎)。

我國首例抗CASPR2腦炎于2012年由解放軍總醫院報道，目前國內關于此類疾病的研究文獻不過寥寥20余篇，可參考病例少，而常用的神經科影像學檢測技術如CT、MRI等又難以幫助醫生對此類疾病進行確診。抗CASPR2腦炎患者最大特點是體內會產生抗CASPR2抗原的相關抗體，利用免疫學技術可檢測到該類抗體。Bastien Joubert等人在18位病人的腦脊液樣品中檢測到了抗CASPR2的IgG抗體，2016年Helena等人在34位病人的血清和腦脊液中都檢測到了抗CASPR2的抗體，檢出率為100％，可見抗CASPR2抗體檢測技術對于該類疾病的診斷和預后有重要意義。

因此，目前針對CASPR2自身抗體常利用免疫熒光技術，雖然檢測率高，但是免疫熒光對細胞培養要求很高，檢測結果易受細胞狀態影響，制片過程繁瑣，且制備好的片子不易保存，很難一次性對大批量樣本同時檢測或針對某一個樣本進行反復檢測。

發明內容

針對現有技術存在的問題，本發明的目的是提供一種對CASPR2自身抗體進行檢測的檢測材料、該材料的制備方法及應用，解決現有的檢測方法檢測耗時長、步驟繁瑣、抗體需求量大、成本高、靈敏度低等問題。

為了實現上述目的，本發明采用如下技術方案予以實現：

人體液中抗CASPR2自身抗體的檢測材料的制備方法，包括以下步驟：

步驟1，獲取CASPR2的CDS序列作為目的基因，將帶有酶切位點的目的基因插入17T2A質粒載體中，得到重組質粒載體17T2A-CASPR2；

其中，17T2A質粒載體包括含氨芐青霉素抗性基因AmpR序列、原核復制子pUC Ori序列、病毒復制子SV4 0O ri序列、RSV啟動子、慢病毒5’LTR、慢病毒3’LTR、Gag順式元件、RRE順式元件、env順式元件、cPPT順式元件、eWPRE增強型土撥鼠乙肝病毒轉錄后調控元件、CMV啟動子、MCS多克隆位點以及T2A元件；

步驟2，將重組質粒載體17T2A-CASPR2轉染入293T細胞中，得到17T2A-CASPR2-293T細胞；

步驟3，將谷胱甘肽作為小分子有機配體，使用親和層析法提取17T2A-CASPR2-293T細胞中的CASPR2抗原；

步驟4，將步驟3提取得到的CASPR2抗原固化在載體膜上，得到人體液中抗CASPR2自身抗體的檢測材料。

優選的，所述的步驟1具體包括以下步驟：