[發明專利]人體液中抗CASPR2自身抗體的檢測材料、制備方法及應用

有效

• 申請號: 201910738486.1
• 申請日: 2019-08-12
• 公開（公告）號: CN110606886B
• 公開（公告）日: 2021-06-01
• 發明（設計）人: 閆亞平;李怡婷;馮昆;李科
• 申請（專利權）人: 陜西脈元生物科技有限公司
• 主分類號: C07K14/705
• 分類號: C07K14/705;C07K1/14;C12N15/867;G01N33/531;G01N33/564
• 代理公司: 西安恒泰知識產權代理事務所 61216
• 代理人: 李婷;金艷婷

1.人體液中抗CASPR2自身抗體的檢測材料，其特征在于，包括樣品封閉材料和樣品檢測材料；

所述的樣品檢測材料通過以下制備方法制備獲得：

步驟1，獲取CASPR2的CDS序列作為目的基因，將帶有酶切位點的目的基因插入17T2A質粒載體中，得到重組質粒載體17T2A-CASPR2；

其中，17T2A質粒載體包括含氨芐青霉素抗性基因AmpR序列、原核復制子pUC Ori序列、病毒復制子SV4 0O ri序列、RSV啟動子、慢病毒5’LTR、慢病毒3’LTR、Gag順式元件、RRE順式元件、env順式元件、cPPT順式元件、eWPRE增強型土撥鼠乙肝病毒轉錄后調控元件、CMV啟動子、MCS多克隆位點以及T2A元件；

步驟1具體包括以下步驟：

步驟1.1：通過人工合成或者PCR方法獲得CASPR2的CDS序列作為目的基因，在目的基因兩端加設SalI/NotI的酶切位點；

步驟1.2：將帶有酶切位點的目的基因插入17T2A質粒載體中，插入位點為SalI/NotI，得到重組質粒，將該重組質粒命名為17T2A-CASPR2；

步驟1.3：對重組質粒17T2A-CASPR2進行測序，將測序正確的帶有目的基因的菌種擴大培養后進行質粒提取，得到重組質粒載體17T2A-CASPR2；

步驟2，將重組質粒載體17T2A-CASPR2轉染入293T細胞中，得到17T2A-CASPR2-293T細胞；

步驟3，將谷胱甘肽作為小分子有機配體，使用親和層析法提取17T2A-CASPR2-293T細胞中的CASPR2抗原；

步驟4，將步驟3提取得到的CASPR2抗原固化在載體膜上，得到樣品檢測材料；

所述的樣品封閉材料包括經過處理的載體膜和固化在處理后載體膜上的17T2A-293T細胞蛋白；所述的載體膜的處理過程為：將載體膜加入蔗糖與葡萄糖按照體積摩爾濃度比為1:1比例混合的混合試劑中，在100℃烘干20-30min或者37℃烘干8～16h；

所述的樣品封閉材料的使用過程為：將待檢測樣品和樣品封閉材料混合后孵育，孵育后加入到樣品檢測材料中再次孵育，洗滌，加入AP標記羊抗人IgG二抗孵育后進行底物顯色。

2.如權利要求1所述的人體液中抗CASPR2自身抗體的檢測材料，其特征在于，所述的步驟2中使用PEI轉染方法、lipofectamin2000、lipofectamin3000、lipA或電轉法將17T2A-CASPR2轉染入293T細胞中，其中，電轉條件為1500V～2000V、25μF、200Ω。

3.如權利要求1所述的人體液中抗CASPR2自身抗體的檢測材料，其特征在于，所述的載體膜為硝酸纖維素膜、PVDF膜、尼龍膜、具有蛋白吸附能力的玻片、塑料材質的細胞培養皿或培養板。