[發明專利]一種利用低熔點瓊脂糖觀察小鼠卵母細胞動態變化的方法

有效

• 申請號: 201910737371.0
• 申請日: 2019-08-12
• 公開（公告）號: CN110527706B
• 公開（公告）日: 2023-09-15
• 發明（設計）人: 程金妹;孫斐;范曉博
• 申請（專利權）人: 南通大學
• 主分類號: C12Q1/02
• 分類號: C12Q1/02;C12N5/075
• 代理公司: 暫無信息
• 代理人: 暫無信息

本發明公開了一種利用低熔點瓊脂糖觀察小鼠卵母細胞動態變化的方法，屬于生物技術領域。本發明包括以下步驟：配置質量體積濃度為1％的低熔點瓊脂糖溶液，將低熔點瓊脂糖溶液覆蓋到含有活細胞的培養液滴上，室溫冷卻，得到活細胞瓊脂糖凝膠，用于不同處理環境的觀察。本發明的優點在于充分利用了低熔點瓊脂糖價格低廉、無毒性、高篩過性和高透明性等特性，以一種操作和裝置均簡單的方法實現了不同處理條件下多枚小鼠卵母細胞實時動態變化的觀察。

技術領域

本發明屬于生物技術領域，具體涉及一種利用低熔點瓊脂糖觀察小鼠卵母細胞動態變化的方法。

背景技術

卵母細胞是兩性生殖細胞中的一種。在父本精子與母本卵子受精的時候，父本精子僅僅提供遺傳物質?DNA，而受精卵的其他一切的營養物質、能量物質、結構組織以及一半的遺傳物質DNA等都來源于母本卵子。因此，卵母細胞質量對后期能否成功受精，或受精以后受精卵以及早期胚胎的質量具有重要的影響。另外，從人口統計學和流行性病理學中我們已經廣泛認識到，當女性年齡達到35周歲以后，隨著女性年齡的增加，其卵母細胞質量越來越差。因此，能夠準確了解高齡卵母細胞發育過程與青年的相比，有何種差別以及在不同處理條件下它們有何種動態變化，具有非常重要的意義。小鼠作為一個很好的實驗模型，為人類疾病的診治以及基因的功能探索提供理論水平和分子水平上的借鑒。

傳統方法研究小鼠卵母細胞的內在機制都是在失活的小鼠卵母細胞中進行。隨著科學技術的發展，人們借助顯微鏡和成像系統，能夠體外實時觀察小鼠卵母細胞的動態變化。但是，由于小鼠卵母細胞處于存活狀態，會運動，而且常常移動到顯微鏡視野以外，導致圖像丟失。為了試驗的需要，人們常常在活細胞工作站的小培養箱中安裝灌流裝置，灌流裝置類似于中國已公開的兩篇專利申請中(CN?201626959U,?CN201626960U)的裝置。但是，這種裝置操作和安裝都比較復雜。活細胞工作站一般都在公共平臺上，安裝一個灌流裝置在小培養箱中會影響其他人做實驗。如果使用完后就拆掉裝置，需要用時就安裝上去，整個過程會比較繁瑣。此外，運用此裝置處理卵母細胞時藥品和培養液均較多，殘留的液體也比較多。

發明內容

有鑒于此，本發明提供了一種利用低熔點瓊脂糖觀察小鼠卵母細胞實時動態變化的方法，利用低熔點瓊脂糖的30℃成膠特性，穩定和培養卵母細胞，有利于活細胞實時成像觀察更加廣泛的應用，簡化了不同處理條件下多枚單一小鼠卵母細胞實時成像觀察。

本發明提供了一種利用低熔點瓊脂糖觀察小鼠卵母細胞動態變化的方法，包括如下步驟：

S1.將低熔點瓊脂糖粉末放入培養液中，在70℃下充分溶解，配置質量體積濃度為1％的低熔點瓊脂糖溶液；

S2.培養皿中滴入培養液液滴，將小鼠的卵母細胞放入所述培養液液滴，得到活細胞培養液滴；

S3.將步驟S1制備得到的質量體積濃度為1％的低熔點瓊脂糖溶液覆蓋到所述活細胞培養液滴上，得到質量體積濃度為0.67％的含有活細胞的低熔點瓊脂糖溶液；

S4.將步驟S3制備得到的含有活細胞的低熔點瓊脂糖溶液室溫冷卻，得到活細胞瓊脂糖凝膠；

S5.將觀察液加入到裝有所述活細胞瓊脂糖凝膠的培養皿中，然后放置到活細胞工作站的觀察箱中進行實時觀察，所述觀察箱的條件為37℃，5％CO₂。

優選的，所述步驟S5還包括通過移液槍更換觀察液，以實現不同液體環境下小鼠卵母細胞的觀察。

優選的，所述培養液為KSOM溶液。

優選的，所述小鼠卵母細胞可以為生發泡時期卵母細胞、第一次減數分裂中期卵母細胞和第二次減數分裂中期卵母細胞中的一種。

優選的，步驟S2中所述活細胞培養液滴中卵母細胞在同一水平面上。

優選的，步驟S2中所述培養液液滴的量為10μL。