[發明專利]一種利用低熔點瓊脂糖觀察小鼠卵母細胞動態變化的方法

有效

• 申請號: 201910737371.0
• 申請日: 2019-08-12
• 公開（公告）號: CN110527706B
• 公開（公告）日: 2023-09-15
• 發明（設計）人: 程金妹;孫斐;范曉博
• 申請（專利權）人: 南通大學
• 主分類號: C12Q1/02
• 分類號: C12Q1/02;C12N5/075
• 代理公司: 暫無信息
• 代理人: 暫無信息

1.一種利用低熔點瓊脂糖觀察小鼠卵母細胞動態變化的方法，其特征在于，所述觀察小鼠卵母細胞動態變化為實時觀察多枚小鼠卵母細胞在不同液體環境下pH值的動態變化，包括如下步驟：

S1.?將低熔點瓊脂糖粉末放入培養液中，在70℃下充分溶解，配置質量體積濃度為1%的低熔點瓊脂糖溶液；所述培養液為KSOM溶液；

S2.?培養皿中滴入培養液液滴，將小鼠的卵母細胞放入所述培養液液滴，得到活細胞培養液滴，輕微振動裝有培養液液滴的培養皿使培養液滴與培養皿的接觸面積增大，液滴高度變矮；所述活細胞培養液滴中卵母細胞在同一水平面上；所述培養液液滴的量為10?μL；

S3.?將步驟S1制備得到的質量體積濃度為1%的低熔點瓊脂糖溶液20?μL覆蓋到所述活細胞培養液滴上，得到質量體積濃度為0.67%的含有活細胞的低熔點瓊脂糖溶液；所述覆蓋為：以所述卵母細胞為中心，將所述低熔點瓊脂糖溶液通過細玻管畫圓螺旋覆蓋到活細胞培養液滴上；

S4.?將步驟S3制備得到的含有活細胞的低熔點瓊脂糖溶液室溫冷卻，所述活細胞固定在瓊脂糖凝膠中，得到活細胞瓊脂糖凝膠；

S5.?將觀察液加入到裝有所述活細胞瓊脂糖凝膠的培養皿中，然后放置到活細胞工作站的觀察箱中進行實時觀察，所述觀察箱的條件為37℃，5%?CO₂；通過移液槍更換觀察液，以實現不同液體環境下小鼠卵母細胞的觀察。

2.根據權利要求1所述的利用低熔點瓊脂糖觀察小鼠卵母細胞動態變化的方法，其特征在于，所述小鼠卵母細胞可以為生發泡時期卵母細胞、第一次減數分裂中期卵母細胞和第二次減數分裂中期卵母細胞中的一種。