[發(fā)明專利]一種重組非洲豬瘟病毒pE120R亞單位可溶性蛋白及其制備方法和應用在審
| 申請?zhí)枺?/td> | 201910732340.6 | 申請日: | 2019-08-09 |
| 公開(公告)號: | CN112341525A | 公開(公告)日: | 2021-02-09 |
| 發(fā)明(設(shè)計)人: | 錢泓;吳有強;張強;徐玉蘭;吳素芳;車影 | 申請(專利權(quán))人: | 浙江海隆生物科技有限公司 |
| 主分類號: | C07K14/01 | 分類號: | C07K14/01;C12N15/34;C12N15/70;A61K39/12;A61P31/20;G01N33/569 |
| 代理公司: | 北京乾誠五洲知識產(chǎn)權(quán)代理有限責任公司 11042 | 代理人: | 付曉青;李廣文 |
| 地址: | 312000 浙江省紹興市*** | 國省代碼: | 浙江;33 |
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| 摘要: | |||
| 搜索關(guān)鍵詞: | 一種 重組 非洲 豬瘟 病毒 pe120r 單位 可溶性 蛋白 及其 制備 方法 應用 | ||
1.一種重組的非洲豬瘟病毒pE120R亞單位可溶性蛋白,其特征在于,所述非洲豬瘟病毒pE120R亞單位可溶性蛋白為非洲豬瘟病毒結(jié)構(gòu)蛋白,其氨基酸序列如SEQ ID NO.3所示。
2.根據(jù)權(quán)利要求1所述的非洲豬瘟病毒pE120R亞單位可溶性蛋白,其特征在于,在如SEQ ID NO.3所示的氨基酸序列的氨基末端或羧基末端連接有poly-His、FLAG、c-myc、HA和poly-Arg中的一種標簽。
3.根據(jù)權(quán)利要求1所述的非洲豬瘟病毒pE120R亞單位可溶性蛋白,其特征在于,密碼子優(yōu)化后的非洲豬瘟病毒pE120R蛋白的編碼基因序列如SEQ ID NO.1所示。
4.一種如權(quán)利要求1~3任一所述的非洲豬瘟病毒pE120R亞單位可溶性蛋白的制備方法,其特征在于,所述方法包括以下步驟:
1)將密碼子優(yōu)化后的非洲豬瘟病毒pE120R蛋白如SEQ ID NO.1所示的編碼基因序列克隆到原核表達載體中,得到含有非洲豬瘟病毒pE120R亞單位可溶性蛋白編碼基因的重組質(zhì)粒;
2)再將所述含有非洲豬瘟病毒pE120R亞單位可溶性蛋白編碼基因的重組質(zhì)粒轉(zhuǎn)化大腸桿菌感受態(tài)細胞中,得到重組表達的菌株;
3)通過培養(yǎng)、篩選步驟2)中所述重組表達的菌株,得到高度表達的菌株;
4)發(fā)酵培養(yǎng)步驟3)中所述高度表達的菌株,純化后,得到重組的非洲豬瘟病毒pE120R亞單位可溶性蛋白。
5.根據(jù)權(quán)利要求4所述的制備方法,其特征在于,步驟1)中,所述原核表達載體為pET30a。
6.根據(jù)權(quán)利要求4所述的制備方法,其特征在于,步驟2)中,所述大腸桿菌菌株選自BL21(DE3)、BL21star(DE3)、arcticexpress中的一種株。
7.一種如權(quán)利要求1~3任一所述的非洲豬瘟病毒pE120R亞單位可溶性蛋白在制備診斷、預防和治療非洲豬瘟的疫苗中的應用。
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